Анализ крови рпга и его расшифровка. Анализ крови рпга: расшифровка результатов Что такое серологический анализ на сифилис

Анализ крови РПГА - одно из важнейших исследований, которое помогает определить наличие патогенных возбудителей в организме.

Метод РПГА очень часто используется при подозрении на сифилис, инфицирование кишечного тракта, коклюш и другие опасные патологии. Когда выписывается направление на подобное исследование, пациенты интересуются, как сдают биоматериал и насколько достоверные результаты дает методика. Об этом и пойдет речь далее.

Что такое РПГА и какие имеет особенности

Далеко не каждый человек знает, что это такое и как расшифровывается аббревиатура РПГА. Под этим сокращением подразумевается реакция пассивной гемагглютинации, методика нужна для определения патогенного процесса в организме.

Этот тест выявляет антигены бледной трепонемы (люис) - патогенного микроорганизма, провоцирующего возникновение сифилиса. Если обследуемый здоров и не страдает от каких-либо хронических заболеваний, при попадании в организм бледной трепонемы иммунитет начинает активно вырабатывать антитела.

Наличие в исследуемом биоматериале антител бледной трепонемы - основание для диагностирования сифилиса.

Условно тестирование на сифилис можно разделить на 2 вида:

• специфическое;
• неспецифическое.

Классификация анализа на категории зависит от вида антител, обнаруженных в полученном образце крови. Несмотря на то что впервые такой метод диагностики был проведен в 1965 году, тестирование оказалось настолько эффективным и результативным, что сегодня оно до сих пор не теряет актуальности.

Несомненным достоинством диагностики является то, что она позволяет обнаружить инфекцию на любом этапе развития, в том числе в латентной стадии.

Показания к проведению

Врачи советуют сдать анализ РПГА в следующих случаях:

• у пациента проявляются клинические симптомы сифилиса (появление эрозий, язв, увеличение лимфоузлов) и регионарной лимфаденопатии; в этом случае РПГА на сифилис является незаменимым тестом, поскольку позволяет выявить болезнь на первичной, вторичной и третичной стадии;
• возникновение признаков очаговой или диффузной алопеции;
• если человек имел половой контакт с носителем сифилиса;
• человек хочет стать донором, сдавать кровь и плазму;
• РПГА входит в ежегодное профилактическое обследование, которое назначается работникам разных госучреждений;
• при оформлении медицинской книжки;
• при госпитализации.

Какие заболевания можно выявить в ходе диагностики

Чаще всего положительный результат теста свидетельствует о наличии сифилиса (в 70% случаев) — как врожденного, так и приобретенного, а также может говорить о таких патологиях:

• ВИЧ-инфекция;
• разные формы гепатита;
• недавно перенесенный инфаркт миокарда;
• возвратный тиф;
• туберкулез;
• наличие венерических заболеваний;
• клещевой боррелиоз;
• дифтерия;
• диффузные заболевания соединительной ткани;
• злоупотребление наркотическими веществами (вводимыми путем инъекций);
• наличие воспалительного процесса в ротовой полости или в районе гениталий;
• формирование новообразований злокачественной природы;
• инфекционный мононуклеоз.

Чтобы получить достоверные сведения, сдавать кровь нужно с учетом всех врачебных рекомендаций, в противном случае возбудитель сифилиса может быть не выявлен.

Почему для диагностики сифилиса назначается именно РПГА

Часто пациенты задаются вопросом, почему при подозрении на сифилис назначают именно РПГА. Специалисты уверяют, что тестирование является столь популярным, поскольку в 99% случаев дает правильный результат.

Реакция агглютинации не произойдет, только если в организме отсутствуют антитела трепонемы, в противном случае обследование обязательно покажет их присутствие.

Медицинская практика показывает, что чувствительность теста очень высока, причем положительная реакция будет выявлена даже при скрытых стадиях заболевания. Благодаря высокой результативности тест не теряет актуальности даже в настоящее время.

Использование РПГА при других патологиях

Сдачу биоматериала на данное исследование часто назначают при подозрении на коклюш, на брюшной тиф, на иерсиниоз (острое инфекционное заболевание ЖКТ). Такая востребованность обусловлена тем, что по чувствительности и результативности РПГА превосходит практически все серологические анализы.

Тест помогает определить большую часть недугов, вызванных патогенными клетками и риккетсиями. При этом в роли антигенов можно использовать ингредиенты бактериальных вакцин, бактериальные экстракты (с коревым или коклюшным диагностикумом), очищенные антигены всевозможных микроорганизмов.

Основные преимущества метода

Данная методика активно используется по всему миру не только потому, что она является очень результативной, но и из-за определенных преимуществ:

• проведение теста не представляет сложности, от пациента требуется лишь сдать кровь;
• для проведения исследования не нужно специальное оборудование;
• исследование не занимает много времени, обычно пациенту оглашают результат в течение 24 часов;
• тест имеет высокую чувствительность и специфичность к сифилису.

Особенности проведения

Для осуществления тестирование требуется венозная кровь. Чтобы расшифровка была достоверной, пациенту необходимо ответственно подойти к подготовке к анализу и строго соблюдать врачебные советы.

• сдавать биологический материал разрешено только на пустой желудок;
• перед мероприятием (если сдача крови осуществляется днем или вечером) разрешено пить только минеральную воду без газов, употреблять жидкость нужно в небольших объемах;
• за пару часов до сдачи биоматериала запрещено курить;
• категорически запрещено употреблять спиртные напитки за двое суток до процедуры;
• если пациент принимает какие-либо лечебные препараты, об этом непременно нужно предупредить лечащего врача;
• если человек чувствует себя плохо, забор крови лучше перенести на другой день, поскольку это может негативно сказаться на расшифровке результата.

Важнейшим этапом является подбор подходящей клиники. Кровь лучше сдавать в современном диагностическом центре с хорошей репутацией.

Как долго проводится анализ?

Точно сказать, как долго делается расшифровка результатов, невозможно. Скорость ее зависит от самого типа исследования, а также от применяемого оборудования.

Чаще всего РПГА расшифровывается в течение суток, но в некоторых случаях процедура может занять от 2 до 4 дней. Если лаборатория будет сильно загружена, пациенту выдадут бланк с результатами не раньше чем через 5 суток.

Расшифровка результатов

Чтобы выявить наличие патологии, к полученной крови нужно добавить специальную сыворотку. Если в организме человека присутствуют трепонемы, произойдет реакция агглютинации, вследствие чего эритроциты выпадут в осадок.

Число склеенных эритроцитов во многом зависит от того, какое количество антител присутствует в реагенте. Пассивная гемагглютинация показывает не только присутствие антител, но также дает медику возможность определить их количество.

Положительный результат

Если тест показывает положительную реакцию, это свидетельствует о присутствии возбудителя болезни. Чтобы поставить более точный диагноз, пациента нужно направить на дополнительную лабораторную и инструментальную диагностику.

Неотъемлемым этапом обследование является проверка всех членов семьи и людей, с которыми инфицированный человек вступал в половой контакт.

Как показывает медицинская практика, примерно у 5% пациентов в ходе тестирования проявляется ложноположительная реакция, что может произойти при игнорировании подготовительного этапа, а также при:

• формировании онкологических новообразований;
• патологии соединительной ткани;
• наличии гепатита разных форм;
• ВИЧ-инфекции.

Также слабоположительный результат может проявиться при беременности. Ложная “+” реакция практически всегда сопровождается низким титром. Интересным моментом является то, что если человек хотя бы раз болел сифилисом, реакция РПГА всегда будет положительной.

Исключение составляют только те случаи, когда сифилис был выявлен на ранней стадии и после этого сразу началась интенсивная терапия.

Отрицательный результат

Тестирование дает отрицательный ответ в таких случаях:

• у пациента в организме отсутствуют патогенные микроорганизмы, являющиеся возбудителем сифилиса;
• с момента заражения прошло менее 3 недель, и иммунитет еще не начал производить антитела;
• забор крови из вены производился неправильно.

Даже если тестирование показало “-”, специалисты все же рекомендуют пройти дополнительные анализы для подстраховки, чтобы убедиться, что патогенные микроорганизмы отсутствуют.

Точность результата

Многочисленные клинические исследования подтвердили, что такое эта методика дает гарантированно правильный результат, если анализ проводился при соблюдении всех правил и пациент строго придерживался врачебных рекомендаций перед забором крови.

Если тестирование дало положительный ответ, вероятность того, что человек инфицирован сифилисом, составляет более 95% .

Неправильная реакция может проявиться только в тех случаях, если с момента инфицирования прошло слишком мало времени либо лаборант не соблюдал инструкцию при исследовании.

Что касается ложноположительного результата, то он может быть, если диагностика проводилась при наличии инфекционных заболеваний или патологических состояний.

Ложный результат отличается от истинного положительного тем, что он очень быстро становится отрицательным, если тестирование провести повторно через 2 недели.

На данный момент анализ РПГА до сих пор остается самым эффективным и достоверным тестом определения сифилиса и прочих опасных патологий. Поэтому при подозрении на наличие многих заболеваний первым делом медики направляют пациента на РПГА.

Трепонемные тесты на сифилис. Общее описание.

Чтобы достоверно диагностировать сифилис и выявить противосифилитические антитела в организме больного (в сыворотке крови или спинномозговой жидкости), используют особые технологии лабораторных исследований - так называемые серологические методы .

При проведении диагностических тестов на сифилис, применяются различные серологические реакции : агглютинации, преципитации, иммунофлюоресценции, связывания комплемента, иммуноферментный анализ и др. В основе всех этих серологических реакций лежит взаимодействие антигенов и антител .

Специфические серологические тесты называются трепонемными потому, что в этих тестах используются бледные трепонемы или их антигены, то есть антигены трепонемного происхождения. Цель трепонемных тестов - выявление специфических антител к антигенным структурам возбудителя сифилиса, то есть антител, направленные конкретно против самих бактерий T. Pallidum, а не против тканей организма, поврежденных трепонемой. Специфические противотрепонемные антитела класса IgM могут быть обнаружены уже в конце второй недели заболевания.

7. Ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Положительные результаты РВ на сифилис у лиц, не страдающих этим заболеванием, называют ложноположительными. Частота ложноположительных результатов у здоровых лиц составляет 0,2-0,25 %. Если процент неспецифических ложноположительных результатов РВ у здоровых очень мал, то при некоторых заболеваниях он может быть высоким.

Все неспецифические результаты серологических реакций можно разделить на следующие основные группы:

1. Заболевания, обусловленные наличием общих антигенов у сходных возбудителей (спирохет): возвратный тиф, фрамбезия, беджель, пинта, трепонема полости рта, лептоспиры.

2. Положительные реакции, обусловленные изменением липидного обмена и изменением в глобулинах сыворотки. К ним относятся положительные результаты у беременных, больных подагрой, нарушения липидного состава в результате отравления свинцом, фосфором, после приема натрия салицилата, дигиталиса и др. В число этих реакций следует включить и положительные реакции при некоторых инфекционных заболеваниях (сыпной тиф, малярия, пневмония, лепра, эндокардит, коллагенозы, инфаркт миокарда, сотрясение мозга, онкологические заболевания, цирроз печени и др.)

3. Технические ошибки проведения. Неправильный выбор дозы комплемента, несоблюдение условий и сроков хранения реагентов, исключение из постановки реакции контрольных образцов сывороток крови, использование загрязненных пробирок и инструментов.

8. Модификация реакции Вассермана

Имеются модификации постановки реакции Вассермана в качественном и количественном вариантах, на холоде, со спинномозговой жидкостью.

Модификация РВ на холоде оказалась более чувствительной. Особенностью методики постановки реакции Вассермана на холоде является трехфазность температурных режимов, при которых протекает связывание комплемента. Эта реакция также ставится с кардиолипиновым и трепонемным антигеном.

Кроме качественной оценки РВ, имеется метод ее количественной постановки с различными разведениями сыворотки крови (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Титр реагинов определяется максимальным разведением, еще дающим резко положительный результат (4+). Количественная постановка РВ имеет значение в диагностике некоторых форм сифилиса и при контроле за эффективностью терапии.

9. Область применения

В России РСКт входит в состав комплекса стандартных серологических реакций на сифилис (КСР).

Реакцию Вассермана с трепонемным и кардиолипиновым антигеном (РСКт) применяют для

• диагностики всех форм сифилиса,
• контроля за эффективностью лечения,
• обследования лиц, имевших половой контакт с больным сифилисом,
• обследования лиц с клиническим и анамнестическим подозрением на сифилис
• при профилактическом обследовании на сифилис больных психиатрических и неврологических стационаров, доноров и беременных, в том числе лиц, направляемых на искусственное прерывание беременности.

В настоящее время, приказом Министерства Здравоохранения РФ, рекомендовано заменить РСКт на более чувствительные трепонемные методы (ИФА или РПГА).

За рубежом реакция Вассермана с трепонемальным антигеном уже давно не применяется в клинической лабораторной практике и не входит в список стандартных тестов, рекомендованных Всемирной Организацией Здравоохранения.

Комплекс классических серологических реакций (КСР)

КСР - это комплекс реакций , применяемых для серодиагностики сифилиса в качестве стандартного метода. Этот комплекс реакций включает в себя реакцию Вассермана с кардиолипиновым антигеном (экстракт из сердца быка, обогащенный лецитином и холестерином) и трепонемным антигеном (обработанная ультразвуком взвесь апатогенных культуральных бледных трепонем), а также микрореакцию преципитации (РМП) с плазмой или инактивированной сывороткой, которая ставится с кардиолипиновым антигеном

КСР становятся положительными в середине первичного периода (его деление на серонегативный и серопозитивный как раз и определяется по КСР), во вторичном периоде КСР положительны у 98-100% больных, а при третичном – лишь у 60- 70%. То есть, по мере увеличения давности заболевания позитивность КСР постепенно снижается.

Достоинства КСР:

1) Дешевизна, простота и быстрота постановки. Особенно это характерно для реакции микропреципитации: РМП в настоящее время – главный скрининговый (отборочный) метод;

2) Нетрепонемные тесты удобно использовать для контроля излеченности сифилиса.

Недостатки КСР:

1) Субъективность оценки результатов реакций («на глаз»);

2) Малая чувствительность при поздних формах сифилиса;

3) Недостаточная специфичность по сравнению с более современными тестами. При их проведении часто отмечаются ложноположительные реакции (ЛПР).

ЛПР могут быть обусловлены перекрестной реактивностью между бледной спирохетой и другими микробами, нарушениями липидного и белкового обмена, нестабильностью клеточных мембран, образованием аутоантител. ЛПР отмечаются при острых (малярия, инфекционный мононуклеоз и др.) и хронических (туберкулез, лепра, гепатит, боррелиоз и др.) инфекциях, инфаркте миокарда, циррозе печени, коллагенозах (особенно – при СКВ), онкопатологии, вакцинации, употреблении наркотиков, злоупотреблении алкоголем и жирной пищей. Ложноположительными могут быть КСР в последние недели беременности, после родов, а у некоторых женщин и во время месячных. Ложноотрицательные результаты КСР могут быть связаны с ВИЧ-инфекцией.

РИТ, РИБТ - Реакция иммобилизации бледных трепонем

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ; Treponema pallidum immobilization test, TPI) - классический метод, который служит для выявления специфических трепонемных антител. Реакция РИБТ использует в качестве антигена патогенные бледные трепонемы T. pallidum (штамм Nichols), выращенные в яичке кролика. РИБТ основывается на потере подвижности живых бледных трепонем после воздействия антител из сыворотки крови пациента и комплемента. Результаты оцениваются посредством темнопольной микроскопии. Несмотря на то, что тест РИБТ был введен в клиническую практику в качестве специфического теста на сифилис, он является трудоемким, технически сложным, времязатратным и дорогим в применении.

1. История метода РИБТ

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) является фактически первым специфическим тестом для диагностики сифилиса. Эта реакция была представлена в 1949 году американскими исследователями Нельсоном и Майером (R. W. Nelson и M. M. Mayer) и подробно рассмотрена в научных работах в последующие десятилетия. Безуспешные попытки использовать живые трепонемы в тестах предпринимались и раньше. Благодаря тому, что Нельсону удалось создать среду, в которой трепонемы сохраняли жизнеспособность до 8 дней, его исследования увенчались успехом.

2. Принцип метода РИБТ

Метод основан на феномене потери бледными трепонемами подвижности в присутствии иммобилизирующих противотрепонемных антител исследуемой сыворотки крови и комплемента в анаэробных условиях. Антигеном служат живые патогенные бледные трепонемы, полученные от искуственно зараженных сифилисом кроликов.

3. Постановка теста РИБТ

В реакции участвуют испытуемая сыворотка, комплемент и антиген. К живым трепонемам, полученным из тканей яичка кролика после искусственного заражения, добавляют сыворотку крови исследуемого. При наличии в сыворотке противотрепонемных антител-иммобилизинов, бледные трепонемы прекращают движение (иммобилизируются). Антитела-иммобилизины относятся к поздним антитрепонемным антителам.

Реакция ставится с инактивированными прогреванием сыворотками или с образцами сывороток, высушенных на вощеной бумаге (сухие капли). Инактивацию сыворотки прогреванием проводят 30 минут при температуре 56°С. Перед взятием крови обследуемый не должен получать медикаменты, особенно препараты пенициллина. Прием препаратов отменяют на срок их возможной задержки в организме.

В качестве антигена используются бактерии штамма Никольса, полученные из 7–10-дневного кроличьего сифилитического орхита (воспаления яичка). Период от момента постановки реакции до регистрации ее результатов длится 18-20 часов, поэтому для сохранения жизнеспособности и хорошей подвижности микроорганизмов необходима среда выживания.

В РИБТ применяют комплемент морских свинок. Для получения комплемента кровь берут обязательно в условиях стерильности у нескольких морских свинок.

В случае бактериального загрязнения комплемент бракуют. Нельзя применять в реакции иммобилизации бледных трепонем консервированный комплемент, т.к. он токсичен для микроорганизмов.

В реакции иммобилизации используют избыток комплемента. Количество его в значительной степени зависит от среды выживания для бледных трепонем.

РИБТ ставят в стерильных боксах, предварительно облученных бактерицидной кварцевой лампой в течение 45-60 минут. Каждую сыворотку крови исследуют в двух пробирках: опытной и контрольной . В обе пробирки вносят исследуемую сыворотку и антиген в необходимых количествах. В опытную пробирку наливают активный комплемент, а в контрольную такое же количество инактивированной сыворотки крови морской свинки. После заполнения содержимое пробирок перемешивают легким встряхиванием.

РИБТ протекает в анаэробных условиях. Пробирки с ингредиентами помещают в микроанаэростат, из которого вакуумным насосом отсасывается атмосферный воздух и нагнетается газовая смесь из баллона (95 частей азота и 5 частей углекислого газа). Микроанаэростат с пробирками помещают в термостат (35°С) на 18-20 часов.

Оценку результатов РИБТ производят после извлечения пробирок из термостата и микроанаэростата (т.е. через 18-20 часов опыта). Пастеровской пипеткой на предметное стекло наносят каплю содержимого пробирки, которую накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле микроскопа (объектив 40, окуляр 10X). Просматривают несколько полей зрения в разных участках препарата, подсчитывая в каждом число подвижных и неподвижных бледных трепонем. Подсчет начинают с препарата из контрольной, а затем из опытной пробирки.

При постановке реакции применяют 5 контрольных исследований: с заведомо положительной и отрицательной сыворотками крови, с активным и инактивированным комплементом и средой выживания для бледных трепонем. Контрольную отрицательную сыворотку крови применяют для суждения о степени подвижности бледных трепонем в данном опыте. Контрольную положительную сыворотку крови - для оценки степени иммобилизирующей активности в условиях данного опыта. Исследование активного и инактивированного комплемента и среды проводят для определения их влияния на подвижность бледных трепонем.

При недостатке комплемента в опыте, иммобилизирующие антитела не проявляют свою активность должным образом и трепонемы остаются подвижными. Поэтому, после опыта проводят определение остаточного комплемента, чтобы оценить, не была ли подвижность бледных трепонем в опытных пробирках обусловлена отсутствием комплемента. Для этого применяется гемолитическая система - выдержанная в термостате смесь из взвеси эритроцитов барана и разведённой гемолитической сыворотки.

Остаточный комплемент определяют добавлением в каждую пробирку гемолитической системы в нужном объеме. Пробирки помещают в термостат при 37° на 45 минут. В опытных пробирках должен наступить гемолиз эритроцитов, в контрольных должна быть задержка гемолиза. Отсутствие в опытных пробирках гемолиза указывает на недостаточное количество комплемента, в этих случаях исследование надо повторить. Повторное исследование сыворотки крови не производят только в том случае, если отмечена 100% иммобилизация бледных трепонем.

4. Учет результатов РИБТ

Подсчет утративших подвижность, иммобилизованных трепонем ведется под микроскопом, методом темнопольной микроскопии. От исследователя требуется навык оценки движения трепонем. Ему следует обращать внимание на интенсивность движений, совершаемых бледной трепонемой. У этой бактерии не всегда можно наблюдать волнообразные сокращения и сгибательные движения, иногда только вращательные. Следует также уметь отличать активные движения трепонем от движения с током жидкости.

Для оценки результатов реакции рассчитывается процент иммобилизации бледных трепонем, т. е. соотношение подвижных и неподвижных трепонем в опыте (с активным комплементом) и контроле (с неактивным комплементом) по формуле:

X = (М – С)×100/М

где М - количество подвижных трепонем в контроле; С - количество подвижных трепонем в опыте; X - % иммобилизации. В практической работе процент иммобилизации определяют по заранее составленной таблице с применением вышеуказанной формулы.

Реакция иммобилизации бледных трепонем оценивается как

• положительная при иммобилизации 51 - 100% трепонем,
• слабоположительная: 31 - 50% неподвижных трепонем,
• сомнительная: 21 - 30% неподвижных трепонем,
• отрицательная: 0 - 20% неподвижных трепонем.

Реакция иммобилизации бледных трепонем становится положительной в конце первичного – начале вторичного периода сифилиса (с 7-8-й недели от момента заражения и более). Вместе с тем РИБТ малопригодна для диагностики ранних стадий сифилиса, поскольку антитела, иммобилизирующие бледные трепонемы и определяемые в реакции, появляются только через 3-6 недель после заражения. Антитела-иммобилизины относятся к классу иммуноглобулинов IgG. Они появляются в крови позже реагинов (антикардиолипиновых антител), позже антител-флюоресцинов (выявляются РИФ и ИФА) и преципитинов (выявляются РМП).

В дальнейшем РИБТ остается положительной. Отмечается высокая чувствительность реакции при поздних формах сифилиса. При вторичном, позднем сифилисе, нейросифилисе, врожденном сифилисе положительный результат РИБТ регистрируется в 95–100 % случаев. При третичном сифилисе, при специфических поражениях внутренних органов, нервной системы, когда РВ часто отрицательная, РИБТ дает положительные результаты в 98 - 100% случаев.

РИБТ долгое время признавалась самым специфичным тестом на сифилис. По данным литературы, специфичность РИБТ равна 99 %, чувствительность колеблется от 79 до 94 %. По данным ЦНИКВИ, чувствительность РИБТ (суммарно, по всем стадиям сифилиса) составляет 87,7%.

7. Область применения метода

Сфера применения РИБТ постепенно сужается из-за длительности постановки, дороговизны и трудоемкости. РИБТ - это достаточно сложный и затратный анализ, требующий высокой квалификации персонала и наличия вивария. В связи с этим применение данного метода в последние годы существенно сократилось. В США этот тест в настоящее время применяется только в исследовательских лабораториях.

Исходя из сложности и дороговизны РИФ и РИБТ, имеет смысл применять их для диагностики поздних и скрытых форм сифилиса. РИБТ сохраняет свои позиции как «реакция-арбитр» при дифференциальной диагностике ранних скрытых форм сифилиса и ложноположительных результатов. Эта реакция может быть полезн при диагностике нейросифилиса и при расхождении результатов других серологических тестов.

РИБТ становится положительной значительно позже, чем РИФ и РВ. Поэтому для диагностики заразных форм сифилиса она не применяется.

РИБТ, как и РИФ, очень медленно негативируется в процессе противосифилитической терапии. Вследствие этого она непригодна для контроля за ходом противосифилитической терапии.

Ложноположительные результаты (ЛПР) при РИБТ редки и отмечены главным образом при ряде трепонематозов (фрамбезия, пинта, беджель), не встречающихся в России, а также при лепре, саркоидозе, СКВ, туберкулезе, циррозе печени и некоторых других редких заболеваниях несифилитической природы. С возрастом пациентов число ложноположительных результатов РИБТ увеличивается.

РИБТ может оказаться ложноположительной, если в исследуемой сыворотке содержатся трепонемоцидные вещества (например, пенициллины, тетрациклины, эритромицин), вызывающие неспецифическую иммобилизацию бледных трепонем, Это может быть следствием приема трепонемоцидных антибиотиков пациентом, поэтому обследование не проводят лицам, получавшим антибиотики в течение последнего месяца. Кровь на РИБТ можно исследовать не ранее 2 недель после окончания приема антибиотиков и других противосифилитических препаратов.

9. Модификации реакции иммобилизации бледных трепонем

Помимо микроанаэростатной методики существует меланжерная постановка РИБТ по Н.М. Овчинникову. Анаэробные условия при постановке реакции создаются помещением реагирующей смеси в меланжер (лейкоцитарный смеситель), оба конца которого закрыты резиновым кольцом. Меланжерная методика реакции позволяет обходиться без вакуумного насоса, баллона со смесью азота и углекислого газа, микроанаэростата. При сравнительном изучении на большом клиническом материале получены результаты, не уступающие классической анаэростатной методике.

10. Особенности, преимущества и недостатки РИБТ

РИБТ - это технически сложный и дорогостоящий метод диагностики. Технология требует значительных средств для содержания кроликов и проведения тестирования. Этот трудоемкий тест в настоящее время он применяется в основном для научных целей. В большинстве зарубежных стран уже почти 40 лет РИБТ практически используется не для диагностических целей, а только в научно-исследовательской работе.

Недостатки реакции:

• РИБТ требует работы с живыми патогенными бледными трепонемами штамма Никольс, остающегося заразным для человека несмотря на адаптацию для кроликов
• постановка реакции сложна, трудоемка и дорогостояща
• необходимо наличия вивария
• требуется высококвалифицированный персонал для постановки реакции, учета результатов и содержания вивария
• субъективность оценки результатов
• отсутствие автоматизации
• нет возможности стандартизировать этот серологический метод.
• реакция неприменима на фоне проводимой антисифилитической терапии
• невозможность использовать для контроля излеченности. РИБТ у больных сифилисом может оставаться положительной в течении многих лет (и даже – пожизненно), несмотря на полученное полноценное лечение.
• реакция может давать ложноположительные результаты у больных злокачественными опухолями, диабетом, лепрой, аутоиммунными заболеваниями, пневмонией, тяжелой сердечно-сосудистой патологией.

Достоинствами РИБТ являются:

1) Достаточно высокая чувствительность;

2) Высокая специфичность.

РИФ (Реакция иммунофлюоресценции)

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - метод экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител. Тесты, основанные на детекции флюоресцентного сигнала, считаются одними из лучших тестов на сифилис.

1. История метода

Трепонемный флюоресцентный тест - реакция иммунофлюоресценции - РИФ (Fluorescent treponemal antibody, FTA) был впервые разработан в 1957 г. Deacon и соавторами (Deacon, Falcone and Harris).

2. Принцип метода

Метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета

В качестве антигена в РИФ используется взвесь живых патогенных бледных трепонем штамма Никольс из орхита кролика, которая высушивается на предметном стекле и фиксируется ацетоном. К высушенным и фиксированным ацетоном к стеклу бледным трепонемам добавляется сыворотка крови больного.

После промывания препарат обрабатывается сывороткой, содержащей антитела против иммуноглобулинов человека, меченные флюоресцином. Еще раз промывают препарат и смотрят его под люминесцентным микроскопом. Если в исследуемой сыворотке есть противотрепонемные антитела-флюоресцины, будет отмечаться желто-зеленое свечение трепонем.

3. Способ проведения исследований методом РИФ

Фиксированный на предметном стекле антиген (патогенные бледные трепонемы) обрабатывается испытуемой сывороткой. После промывания препарат обрабатывается люминесцентной сывороткой против иммуноглобулинов человека, меченной флюорохромом. При этом образующийся флюоресцирующий комплекс (античеловеческий глобулин + флюоресцеин тиоизоционат) связывается с человеческим глобулином на поверхности бледной трепонемы, обеспечивая свечение бледной трепонемы под люминесцентным микроскопом.

Для выявления комплексов антиген-антитело применяют люминесцирующую сыворотку, представляющую конъюгированные с ФИТЦ антивидовые (противочеловеческие) иммуноглобулины. Наличие в сыворотке антител к трепонемам определяют по свечению трепонем при исследовании в люминесцентном микроскопе. Тест проводят в качественном и полуколичественном вариантах.

4. Учет результатов

Визуализация результатов РИФ проводится с помощью люминесцентного микроскопа. Результаты оцениваются по степени свечения трепонем в препарате. При наличии антител видно свечение трепонем, если же в сыворотке не было противотрепонемных антител, то трепонемы не видны. Степень свечения фиксированных к стеклу высушенных бледных трепонем обозначаются в «плюсах» (от «–» до «++++»). Отрицательный результат - отсутствие свечения или уровень фона - 1+.

5. При каких периодах заболевания лучше использовать

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) достаточно чувствительна на всех стадиях инфекции, с окончания периода инкубации до позднего сифилиса. Первичный период сифилиса при классическом течении начинается через 3-4 недели после заражения. РИФ становится положительной в первые дни первичного периода или даже в конце инкубационного периода, с 3-й недели после инфицирования. Результаты РИФ остаются положительными во всех периодах, в том числе при поздних формах.

РИФ становится положительной несколько раньше, чем РВ. По некоторым данным, положительная РИФ бывает у 80% больных первичным серонегативным сифилисом. Во вторичном периоде РИФ положительная почти в 100% случаев. Она всегда положительная при латентном сифилисе и дает 95 - 100% положительных результатов при поздних формах заболевания и врожденном сифилисе.

6. Чувствительность и специфичность

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – это группа методов, обладающих высокой чувствительностью и специфичностью. РИФ чувствительна во всех стадиях инфекции, начиная от периода инкубации и заканчивая поздним сифилисом. По данным ВОЗ, чувствительность РИФ при первичном сифилисе – 70-100%, при вторичном и позднем – 96–100%, специфичность – 94–100%. По данным ЦНИКВИ, чувствительность РИФ при всех формах сифилиса составляет 99,1%.

Специфичность РИФ может быть повышена путем предварительной обработки исследуемой сыворотки сорбентом - ультраозвученным трепонемным антигеном, связывающим групповые антитела (РИФ-абс).

7. Область применения метода

РИФ применяется:

• как подтверждающая реакция при раннем, скрытом сифилисе
• при установлении ретроспективного диагноза
• для дифференциации скрытых форм сифилиса и ложноположительных результатов исследований на сифилис.
• как подтверждающий тест при нейросифилисе.

РИФ достаточно широко используют в качестве подтверждающего теста, но она не предназначена для рутинного использования или скрининга, поскольку в  техническом отношении трудна для постановки. Для выполнения РИФ необходимо наличие вивария или приобретение взвеси патогенных бледных трепонем, что ограничивает возможности реакции. Однако в последние годы на отечественном рынке начали появляться тест-системы, позволяющие проводить реакцию при отсутствии вивария и собственного лабораторного штамма патогенных бледных трепонем.

8. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

ЛПР при постановке РИФ бывают редко (при коллагенозах, боррелиозе).

РИФ до сих пор считают одним из лучших тестов на сифилис, «золотым стандартом» серодиагностики. РИФ в сравнении с РИБТ более проста в постановке,

Несмотря на высокую диагностическую ценность, широкому внедрению РИФ в повседневную практику препятствуют необходимость использования живой T. pallidum, высокая стоимость и длительность проведения исследования. Постановка реакции трудоемка. Кроме того, оценка результатов РИФ носит субъективный характер.

Достоинствами РИФ и РИБТ являются:

1) Высокая чувствительность (особенно для РИФ);

2) Высокая специфичность (особенно для РИБТ).

Недостатки РИФ и РИБТ:

1) Техническая сложность, дороговизна методов.

2) Субъективность оценки результатов, отсутствие автоматизации;

3) РИФ и РИБТ у больных сифилисом могут оставаться положительными в течении многих лет (и даже – пожизненно), несмотря на полученное полноценное лечение. Поэтому эти реакции невозможно использовать для контроля излеченности.

10. Модификации метода

На практике для серодиагностики сифилиса используется и использовалось несколько модификаций реакции иммунофлюоресценции:

• РИФ-абс – наиболее чувствительный метод серодиагностики сифилиса, становится позитивным раньше других реакций (с 3-ей недели от заражения);
• РИФ-200 (сыворотка пациента при постановке разводится в 200 раз) – высоко специфичный метод серодиагностики сифилиса.
• РИФ-10 (разведение испытуемой сыворотке в 10 раз) - более чувствительный метод, чем РИФ-200.
• РИФ-ц проводят с ликвором.
• РИФ-абс-IgM - выявление ранних противотрепонемных антител класса IgM.

1. Наибольшее распространение получила модификация РИФ-абс - реакция иммунофлюоресценции с абсорбцией. Перед постановкой реакции сыворотка обследуемого истощается смесью непатогенных трепонем для исключения перекрестных реакций. Групповые антитела удаляются из исследуемой сыворотки с помощью разрушенных ультразвуком культуральных трепонем, что существенно повышает специфичность реакции. Поскольку исследуемая сыворотка используется в разведении 1:5, то РИФ-абс отличается высокой чувствительностью.

Основными показаниями для использования РИФ-абс в клинической практике являются:

• диагностика скрытых и поздних форм сифилиса,
• выявление ложноположительных результатов КСР и РМП, особенно у беременных и соматических больных при подозрении на сифилис,
• для установления ретроспективного диагноза заболевания.

РИФ-абс мало информативна при оценке результатов лечения: у 85 % больных, получивших адекватную противосифилитическую терапию, положительные результаты РИФ сохраняются многие годы.

Эту реакцию называют «золотым стандартом» серодиагностики сифилиса. Ее используют для арбитражных случаев, но для достоверного результата необходима свежая концентрированная взвесь T. pallidum штамма Nichols из семидневного орхита у кролика, которую нельзя замораживать.

2. В СССР ставилась в двух модификациях - РИФ-10 и РИФ-200 , т. е. с разведением испытуемой сыворотки в 10 и 200 раз. РИФ-200 - исследуемая сыворотка разводится в 200 раз для уменьшения количества ложноположительных результатов. Это обеспечивает высокую специфичность реакции, но чувствительность ее несколько падает. РИФ-10 более чувствительна, но чаще дает неспецифические положительные результаты, чем РИФ-200, отличающаяся высокой специфичностью. РИФ-10 более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс – более специфичны.

Чувствительность РИФ-200 и РИФ-абс оценивается 84–99 %, а специфичность - 97–99 %.

3. РИФ-ц проводят с ликвором. Реакция ставится с использованием цельной спинномозговой жидкости для выявления специфических поражений ЦНС.

4. Реакция РИФ-абс-IgM предложена для выявления ранних противотрепонемных антител класса IgM. Эта реакция может использоваться для диагностики врожденного сифилиса, ранних форм сифилиса и дифференциальной диагностики случаев реинфекции и серорецидива.

Известны 2 модификации этой реакции:

– FTA-ABS-IgM, основанная на использовании во второй фазе реакции конъюгата анти-IgM (меченные флюоресцеином антитела к IgM человека) вместо античеловеческого флюоресцирующего глобулина;

– российский вариант РИФ-абс-IgM, отличающийся тем, что к исследуемой сыворотке крови добавляется сорбент, удаляющий IgG-антитела, а с оставшимися IgM-антителами ставится РИФ-абс.

Основными показаниями к постановке РИФ-абс-IgM являются:

– серодиагностика врожденного сифилиса при отсутствии у ребенка манифестных проявлений врожденного сифилиса на коже и слизистых оболочках;

– дифференциальная диагностика реинфекции и клинико-серологического или серологического рецидива сифилиса, при котором РИФ-абс-IgM будет отрицательной, а РИФ-абс - положительной;

– оценка эффективности терапии раннего приобретенного или врожденного сифилиса: после адекватного лечения РИФ-абс-IgM становится отрицательной в течение ближайших 3–6 месяцев.

Эта реакция может использоваться для выявления врожденного сифилиса. Известно, что крупные молекулы IgM не могут проходить через здоровую плаценту. Следовательно, антитела класса М против бледной трепонемы могут появиться в организме ребенка или вследствие нарушения барьерной функции плаценты или же они вырабатываются организмом ребенка, больного сифилисом. Антитела класса IgM появляются в крови больного сифилисом уже в первые недели болезни, а антитела класса IgG появляются позже. Раздельное определение антител обоих классов оказывается исключительно полезным при диагностике врожденного сифилиса у детей, так как наличие у ребенка на первом месяце жизни антител класса IgM будет указывать, что они образованы организмом больного сифилисом ребенка, в то время как выявление только антител IgG будет говорить о материнском происхождении последних.

Постановка реакции 19S(IgM)-РИФ-абс предполагает предварительное разделение c помощью гель-фильтрации более крупных молекул 19S IgM от

фракции более мелких молекул 7S IgG. Дальнейшее исследование в реакции РИФ-абс сыворотки крови, содержащей только фракцию 19S IgM,

устраняет все возможные источники ошибок. Но техника постановки этой реакции сложная и трудоемкая, требует специального оборудования и подготовки специалистов.

Реакция иммунного прилипания (РИП, TPIA - Treponema pallida immunoadherence).

Эта реакция основана на использовании феномена, который в 1912 г. описал Rieckenberg. РИП основана на том, что вирулентные тканевые трепонемы, сенсибилизированные сывороткой больного сифилисом, в присутствии комплемента и эритроцитов прилипают к поверхности эритроцитов и при центрифугировании увлекаются с ними в осадок, исчезая из надосадочной жидкости.

Для постановки реакции используются следующие ингредиенты: испытуемая сыворотка, антиген, комплемент, эритроциты донора, изотонический раствор натрия хлорида. В качестве антигена используют взвесь бледных трепонем штамма Никольса.

Наиболее широко применительно к серодиагностике сифилиса этот тест изучался отечественными и зарубежными авторами в 50-60-е годы. Данные о ценности РИП как диагностического теста были противоречивы. Реакция требовала максимальной точности, так как при неточном разливе ингредиентов, при избытке или недостатке исследуемого материала в препарате получались недостоверные результаты.

В России обширные исследования провела Л.В. Сазонова, которая получила близкие результаты в РИП и РИТ при использовании свежеприготовленной взвеси патогенных бледных трепонем штамма Никольса. Однако применение прогретого или консервированного фенолом антигена резко искажало результаты реакции и делало антиген нестабильным. Рекомендовать данный тест для замены РИТ Л.В. Сазонова сочла невозможным.

Г.П. Авдеева, применив при изготовлении антигена другие температурный и временной режимы, получила при изучении РИП иные результаты. По ее данным, чувствительность этой реакции выше чувствительности KCP и РИТ, но несколько уступает РИФ, а специфичность РИП, РИТ и РИФ близка.

Однако отсутствие производственного выпуска антигена для РИП не позволило более широко изучить этот тест и внедрить его в практику.

РПГА-реакция пассивной гемагглютинации

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) является распространенным серологическим тестом, прочно укоренившимся в лабораторной практике. обладает достаточно высоким уровнем эффективности при исследовании.

1. История метода РПГА

Впервые о применении РПГА для диагностики сифилиса сообщили G.Blumental и W.Bachman (1932). В 1965 г, для диагностики сифилиса была предложена реакция непрямой, или пассивной, гемагглютинации. О модификации реакции с использованием различных антигенов сообщалось Ratlev Т. в 1965 - 1967 гг. Микромодификацию РПГА предложили Сох Р.М. и соавторы в 1969 году. Первую коммерческую тест-систему разработали японские ученые Tomisava et. al. в 1969 г.

2. Принцип метода РПГА

Из подготовленной однородной взвеси эритроцитов, «нагруженных» антигенами, при добавлении исследуемой сыворотки, содержащей антитела, выпадает осадок в виде хлопьев. Полученный осадок состоит из эритроцитов, "склеенных" антителами, и называется «гемагглютинат» . Взвесь эритроцитов подготавливается заранее и поставляется в составе диагностических тест-систем.

Процесс склеивания эритроцитов, на поверхности которых присутствуют антигены, называется «гемагглютинация». Склеивание происходит под действием специфических антител (агглютининов). Реакция называется «пассивной» , т.к. собственные антигены эритроцитов не вступают в реакцию, а сами эритроциты выполняют исключительно вспомогательную индикаторную функцию.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации - это разновидность реакции агглютинации, в которой в качестве носителей антигенов используются именно эритроциты (от греч. háima - кровь), а не другие частицы. В общем случае, в реакции агглютинации под действием антител происходит склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток - не обязательно эритроцитов, а, например частиц латекса, бактерий или других антигеннесущих корпускулярных частиц.

При реакции пассивной гемагглютинации для диагностики сифилиса, в качестве антигена используются эритроциты барана или птиц, покрытые антигенами бледных трепонем. При добавлении сыворотки, содержащей специфические антитела, происходит склеивание эритроцитов (агглютинация).

Реакцию РПГА относят к иммунологическим методам, т.к. она основана на специфическом взаимодействии антигена патогенной бледной трепонемы с антителом. В соответствии с «теорие решетки» агглютинация является результатом «сшивки» поверхностных молекул антигена молекулами антител (иммуноглобулинов).

3. Постановка реакции пассивной гемагглютинации

РПГА ставят в пластиковых планшетах или в пробирках с разведениями сыворотки крови больного, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум.

Процесс соединения антигена с эритроцитами называют сенсибилизацией, а полученный таким образом искусственный корпускулярный антиген - сенсибилизированными эритроцитами. Эритроцитарными диагностикумами называются эритроциты, сенсибилизированные антигеном.

Для приготовления диагностикума применяют обработанные вначале формалином, затем танином эритроциты барана или птиц (чаще куриные), которые подвергают сенсибилизации ультра-озвученным антигеном патогенной бледной трепонемы (штамм Никольса) или рекомбинантными белками бледной трепонемы (TpN15, TpN17, TpN47). Также могут использоваться эритроциты барана, сенсибилизированных ультраозвученным антигеном культуральных бледных трепонем.

Исследуется только сыворотка (не использовать плазму крови) . Не подходят гемолизированные и мутные образцы. Отрицательным контролем служат несенсибилизированные эритроциты (для исключения наличия антиэритроцитарных антител). В каждой серии постановок используют положительный и отрицательный контроль.

В лунки (ячейки) иммунологического планшета вносят образцы исследуемой сыворотки крови и тест-эритроциты. Если в сыворотке крови пациента содержатся специфические противотрепонемные антитела, то при добавлении исследуемой сыворотки в лунку с антигеном происходит образование комплексов "антиген-антитело", связанных с поверхностью носителей (эритроцитов). Визуально это проявляется склеиванием эритроцитов, т. е. гемагглютинацией, которая видна невооруженным глазом. Иммунные комплексы "антитело-антиген-эритроцит", которые под действием сил тяжести постепенно опускаются вниз, распределяются по всей поверхности дна лунки и формируют характерную картину «перевернутого зонтика».

В зависимости от количества антител, содержащихся в исследуемом образце, изображение «перевернутого зонтика» варьируется от максимального, занимающего всю поверхность дна лунки, до небольшого участка в центральной, самой низко расположенной его части (с просветлением в центре и формированием более интенсивного кольца из осевших эритроцитов по периферии).

Иммунные комплексы не образуются, если в образце нет специфических антител или при добавлении в реакцию контрольных (интактных) эритроцитов. При этом, эритроциты постепенно собираются в самой нижней точке дна лунки, формируя фигуру в виде компактного пятна или «пуговки», иногда с незначительным просветлением в центре.

Если сыворотка крови человека содержит антиэритроцитарные антитела, то «зонтик» сформируется в любом случае - как в реакции с тест-эритроцитами, так и с контрольными эритроцитами. В этом случае для выявления специфических антитрепонемных антител рекомендуют применять другие медицинские технологии.

Возможен феномен прозоны (невозможность реакции из-за избытка антител), устраняемый разведением сыворотки.

4. Учет результатов реакции пассивной гемагглютинации

Результаты РПГА учитывают визуально через 60-120 минут при постановке микрометода и через 2–4 ч или на следующий день при постановке макроварианта. При использовании более крупных (ядросодержащих) эритроцитов птиц получают более четкую картину, учет результатов проводят в более ранние сроки.

Возможно определение титра (высокий титр РПГА ≥ 1:2 560).

Результаты исследования оцениваются по 4+ системе (от «–» до «++++») по величине образовавшейся пленочки. При появлении агглютинации эритроциты располагаются на поверхности лунки в виде «зонтика», а при отрицательном результате эритроциты свободно соскальзывают вниз и скапливаются на дне в центре лунки в виде «пуговки».

Общепринятая оценка результатов РПГА:

4+ - положительная РПГА. Агглютинированные эритроциты в виде «зонтика» равномерно выстилают всю поверхность лунки;

3+ - положительная РПГА. Эритроциты выстилают всю поверхность лунки, но часть их «соскальзывает» к центру. При этом по периферии осадка формируется заметное кольцо;

2+ - слабоположительная РПГА. Эритроциты образуют пленку на небольшом участке нижней части лунки, формируя плотное кольцо из осадка эритроцитов с заметным просветлением в центре;

1+ - неопределенная РПГА, эритроциты образуют рыхлый осадок на дне лунки с нечеткими краями и незначительным просветом в центре;

(–) - отрицательная РПГА, все эритроциты лежат на дне лунки в виде компактного осадка («пуговки» или колечка) на чистом окружающем фоне (без окружающего зернистогоосаждения).

В зарубежной практике результаты РПГА также оценивают как реактивные (в случае образования агглютината), слабореактивные (если образования незначительны) и нереактивные (если не наблюдается агглютинации).

Учет результатов реакции может производиться автоматически с применением специальных анализаторов. Помимо качественного исследования, во всех тест-системах предусмотрен количественный анализ с определением титра.

5. При каких периодах заболевания лучше использовать РПГА

РПГА становится положительной в середине первичного периода (7-8 недель от момента заражения, через 3–4 недели после появления твердого шанкра) и после лечения годами сохраняется положительной.

При очень высоком уровне антител к трепонеме в исследуемой сыворотке (что наиболее характерно для вторичного сифилиса) возможен ложноотрицательный результат РПГА (так называемый феномен «прозоны»).

Специфические антитела-агглютинины выявляются в крови переболевших сифилисом людей в течение длительного времени, поэтому РПГА не может быть рекомендована для дифференциальной диагностики реинфекции или определения остроты инфекционного процесса.

РПГА не применяется для контроля излеченности, т.к. может оставаться положительной спустя много лет после выздоровления. Вместе с тем ее можно использовать как дополнительный (к РМП или к RPR) метод при контроле эффективности проведенного лечения, исследуя динамику снижения титров антител. Обязательным условием при этом является использование той же РПГА тест-системы, что и при первом (до лечения) обследовании пациента, а также проведение исследования в той же лаборатории.

6. Чувствительность и специфичность РПГА

РПГА считается высокочувствительным и специфичным тестом. Эта реакция является ценным диагностическим тестом при всех формах сифилиса, но особенно чувствительна она при поздних формах заболевания. В зависимости от стадии заболевания чувствительность РПГА колеблется. При первичном сифилисе чувствительность РПГА составляет 76% (и выше), при вторичном сифилисе – до 100%. При скрытом раннем - 97 %, при позднем сифилисе - 94 %, со специфичностью 98–100%. Более низкая чувствительность при свежих формах заболевания объясняется более поздним формированием агглютининов.

По данным ГУ «ЦНИКВИ Росздрава» чувствительность РПГА при диагностике различных форм сифилиса составила 99,4%. Большинство исследователей отмечают 98-99% специфичность РПГА.

По чувствительности и специфичности РПГА не уступает, а при поздних формах и врожденном сифилисе даже превосходит РИФ и РИБТ.

7. Область применения метода РПГА

РПГА может применяться в качестве как скринингового, так и подтверждающего теста; может быть использована в полуколичественном варианте с расчетом титра антител. Разработаны количественный метод постановки РПГА, микрометод, а также автоматизированная реакция микрогемагглютинации.

8. Особенности, преимущества и недостатки РПГА

По данным литературы, РПГА стабильно заняла лидирующее место в клинической практике в большинстве стран мира. РПГА –  наиболее  широко  используемый  тест  в  клиниках ИППП за  рубежом. 

Методика РПГА проста в выполнении, не требует специального оборудования: для ее постановки нужен лишь планшет для гемагглютинации. Исследование не занимает длительного времени; реакция высоко чувствительна и специфична. Апробация метода в клинической практике показала, что он является исключительно простым, дешевым и чувствительным. Как и ИФА, РПГА проста в исполнении, не требует высокой квалификации персонала и специального оборудования, возможна ее автоматизация.

Преимущества РПГА-теста:

• простой в постановке и интерпретации, 
• не требует специального оборудования, 
• время получения результата – 45 минут, 
• пригоден для массового скрининга (необходимо всего 25 мкл сыворотки в разведении 1:20), 
• высокая степень стандартизации, 
• наличие внутренних контролей, 
• большой срок годности, 
• приемлемая цена 
• возможность автоматизации учета. 

Следует отметить также недостатки РПГА: 

• возможность неспецифических реакций при наличии антиэритроцитарных антител, 
• отсутствие корреляции титра и стадии сифилиса,
•  более поздняя позитивация реакции на ранних стадиях сифилиса, 
• возможность ложноположительных реакций у лиц, принимавших алкоголь, наркоманов, 
• чувствительность к вибрации и температуре в лаборатории.

Преимуществами РПГА по сравнению с РИБТ и РИФ являются:

• использование промышленных тест-систем,
• возможность автоматизации реакции,
• нет необходимости работать с живой бледной трепонемой,
• отпадает потребность в виварии.

9. Источники и причины ошибок при постановке РПГА, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Реакция пассивной гемагглютинации является относительно несложным исследованием; при ее выполнении необходимо соблюдать все рекомендации производителей диагностикума и правила работы в клинико-диагностической лаборатории. Допущенные ошибки могут приводить к появлению и регистрации как ложноотрицательных, так и ложноположительных результатов реакции. Ложноположительные результаты РПГА могут быть обусловлены влиянием человеческого фактора и факторов биологической природы.

Ложноположительные результаты могут быть получены

• при исследовании сывороток крови пациентов с невенерическими трепонематозами,
• за счет ревматоидного фактора
• за счет перекрестно реагирующих с трепонемным антигеном антител, образующихся при различных системных или индуцированных лекарствами и наркотиками нарушениях обмена,
• из-за аномального уровня иммуноглобулинов;
• у новорожденных детей - за счет образования в организме плода или ребенка IgM-антител к IgG матери, что осложняет трактовку результатов и диагностику врожденного сифилиса.

Ошибки, вызванные влиянием фактора участия человека на исследование:

• загрязненные микропланшеты
• неправильное пипетирование
• наличие вибрации в лаборатории
• температура воздуха в лаборатории выходит за диапазон температуры: 18–25 градусов

К наиболее типичным техническим ошибкам при постановке РПГА, приводящим к получению недостоверных результатов, следует отнести:

• неточное разведение ингредиентов,
• нарушение температурного режима,
• нарушение времени инкубации реагентов,
• нарушение сроков нанесения реагентов на планшет,
• несоответствие рН растворов требуемым,
• загрязнение лабораторной посуды.

Источником ошибок при постановке РПГА могут являться и следующие технические моменты:

• исключение из постановки реакции контрольных сывороток крови;
• неравномерная концентрация эритроцитов в диагностикуме вследствие недостаточного его перемешивания перед использованием;
• нарушение сроков и условий хранения диагностикума и контрольных эритроцитов; использование наборов с истекшим сроком годности;
• использование при постановке реакций загрязненных пробирок, наконечников пипеточных дозаторов, пипеток, иммунологических планшетов, растворов;
• неточности при первичном разведении образца сыворотки крови;
• недостаточная тщательность выполнения последовательных двукратных разведений;
• несоблюдение температурного режима и времени инкубации;
• наличие посторонних вибраций и встряхиваний иммунологического планшета во время инкубации;
• нарушение методики постановки РПГА, выражающееся в отказе от выполнения исследования с контрольными эритроцитами.

Применение плазмы крови, содержащей антикоагулянты, способные вызывать неспецифическую агглютинацию эритроцитов (РПГА), может привести к получению результатов, не подлежащих трактовке.

Число ложноположительных и ложноотрицательных результатов меньше, чем при других серологических тестах. ЛПР при постановке РПГА бывают редко и возможны при трепонематозах (фрамбезия, беджель, пинта). Также, ложноположительные результаты регистрировались (в сумме менее 1 %) у наркоманов, у больных инфекционным мононуклеозом, боррелиозом, лепрой, при коллагенозах, циррозе печени, лимфосаркоме, а также у беременных.

Ложноотрицательные результаты реакции могут быть обусловлены конкуренцией между IgM- и IgG-антителами. Также ложноотрицательные результаты возможны у ВИЧ-инфицированных пациентов.

10. Модификации метода РПГА

Существует микро- и макромодификации постановки РПГА, чаще используется первая из-за экономичности, быстроты постановки и учета результатов.

Кроме того, разработан автоматический диагностический комплекс анализа изображений, что позволило производить количественную автоматическую оценку результатов и исключить субъективизм в интерпретации полученных данных. Аппаратно-программный комплекс распознает изображение, проводит обработку данных и выдает ответ в относительных единицах. 

Для автоматизации учета результатов РПГА также используются ридеры и автоматические анализаторы.

ТРРА (Treponema pallidum particle agglutination) - реакция агглютинации искусственных частиц для выявления антител к Treponema pallidum

Краткое описание теста TPPA

В настоящее время для диагностики сифилиса применяют также модификацию метода пассивной гемагглютинации - ТРРА (Treponema pallidum particle agglutination), в которой антиген бледных трепонем фиксирован на желатиновых частицах. Так как на искусственных полимерных частицах нет собственных антигенов, обусловливающих биологическую активность, то наборы для серодиагностики сифилиса на их основе имеют основания считаться более совершенными. Использование биологически инертных искусственных частиц сводит к минимуму неспецифическую агглютинацию, обычно наблюдаемую при использовании других носителей.

TPPA используется для серологической диагностики антител к различным видам и подвидам патогенных трепонем. Этот тест может использоваться для определения антител к возбудителям сифилиса, пинты, беджеля и фрамбезии.

Процедура исследования весьма проста и не требует специального оборудования - используются стандартные «U»-образные микропланшеты. В основе теста лежит агглютинация желатиновых частиц, сенсибилизированных антигенами T. pallidum, антителами, содержащимися в сыворотке крови пациента.

TPPA - это подтверждающий трепонемный тест, который удобно использовать как для исследования малого числа образцов, так и для массового скрининга. TPPA используется за рубежом в качестве подтверждающего теста и для замены микро-гемагглютинационного теста MHA-TP (microhemagglutination assay for antibodies to T. pallidum).

Чувствительность теста TPPA составляет от 85% до 100%, а специфичность - от 98% до 100%. Чувствительность TPPA для первичного сифилиса - 88%, для вторичного и позднего скрытого сифилиса 98%-100%.

Если TPPA используется для диагностики сифилиса, то антитела к другим видам трепонем (таким, как T. pallidum endemicum, pertenue, или carateum) могут вызвать ложноположительные результаты. Существует ряд методов, позволяющих удалить эти антитела из сывороточных образцов перед началом теста.

Принцип теста TPPA

TPPA - это метод пассивной агглютинации желатиновых частиц в сыворотке или плазме крови человека. Сыворотка, содержащая антитела к патогенной трепонеме, реагирует с желатиновыми частицами, сенсибилизированными антигеном бледных трепонем штамма Никольса, подвергнутых действию ультразвука. В результате реакции, в лунке планшета для микротитрования формируется гладкая пленка агглютинированных желатиновых частиц.

Если антитела отсутствуют, то частицы оседают на дно лунки планшета, формируя компактную «пуговку» из неагглютинированных частиц. Контрольные лунки с несенсибилизированными желатиновыми частицами должны также показать такую компактную «пуговку» для каждой сыворотки, то есть отсутствие агглютинации.

Применение теста TPPA

ТРРА - это тест универсального назначения, который может одинаково успешно применяться как при обязательном профилактическом обследовании групп населения на сифилис (скрининге), так и в специализированных дерматовенерологических учреждениях. Достоинством теста TPPA является его высокая чувствительность, не уступающая классическим тестам, которые до недавнего времени являлись «золотым стандартом» серодиагностики сифилиса. Среди других достоинств теста - высокая воспроизводимость, а также простота и скорость постановки реакции.

Тест TPPA применяется для подтверждения положительных результатов нетрепонемных скрининговых тестов на сифилис, таких, как тест VDRL, а также для обследования пациентов с отрицательными результатаи нетрепонемных тестов, но имеющих признаки или симптомы, указывающие на поздний сифилис. Не рекомендуется использование TPPA в качестве единственного скринингового теста на сифилис.

Кроме того, агглютинационный тест ТРРА может использоваться для исследования образцов спинномозговой жидкости при диагностике нейросифилиса. При этом, как и в отношении других серологических тестов, интерпретация результатов должна проводиться при обязательном сочетании с другими показателями и симптомами заболевания.

Результаты теста TPPA

Оценка результата происходит по системе «плюсов» - от (–) до (2+). Результаты теста видны невооруженным глазом и интерпретируются следующим образом:

Степень агглютинации	Показатель теста	Интерпретация
Агглютинированные частицы равномерно выстилают дно лунки планшета	2+	Положительный
Достоверное большое кольцо с неровными внешними полями и периферической агглютинацией	1+	Положительный
Частицы образуют компактное кольцо с просветом в центре и плавными гладкими внешними границами	±	Слабоположительный
Частицы формируют в центре лунки компактное кольцо с незначительным просветом в центре и ровной внешней границей	–	Отрицательный
Частицы формируют в центре лунки «пуговку» с ровной внешней границей	–	Отрицательный

Учет результатов производят, чтобы определить соответствие описанию выше. Образцы, показавшие неопределенный результат (±) необходимо исследовать повторно. В случае, если в нескольких тестах методом TPPA образец показывает неопределенный результат, рекомендуется провести исследование с помощью других методов.

Результаты анализа не следует рассматривать изолированно. Например, на ранней стадии инфекции число антител ещё слишком незначительно, вследствие чего TPPA и многим другим методам не хватает чувствительности. Поэтому, в случае подозрения на сифилис, даже если результаты тестов отрицательны, образцы необходимо исследовать ещё раз. Для постановки диагноза необходимо учитывать клинические симптомы, имеющиеся у пациента, клиническую историю и другие данные.

Так же, как и в реакции РПГА, для TPPA может наблюдаться феномен прозоны и ложноотрицательный результат в случае, если образец сыворотки содержит слишком высокий титр антител.

ИФА - Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА; The enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) является одним из многочисленных методов серологической диагностики инфекционных заболеваний. Иммуноферментный анализ (ИФА) в серодиагностике сифилиса - это тест на антитела классов M, G и A (IgM, IgG, IgA) против антигенов бледной трепонемы. Возможна постановка ИФА с ликвором.

Внедрение в практику иммуноферментного анализа (ИФА) вместо реакции Вассермана и других кардиолипиновых тестов значительно повысило качество лабораторной диагностики сифилиса. Существенным преимуществом данного метода является возможность автоматизации процесса исследования, что позволяет снизить влияние человеческого фактора.

1. История метода ИФА

Основные принципы иммуноферментного анализа на поверхности твердофазного носителя разработали E.Engvar и соавтор. (1971), B.Van Weeman и A.Schuurs (1971). Разработанный ими иммуноферментный анализ впервые был предложен для диагностики сифилиса в 1975 г. J. Veldkamp и A. Visser, которые оценили потенциал этого автоматизированного теста. ИФА начал повсеместно использоваться в диагностике сифилиса в 1980-е гг., когда были разработаны и сертифицированы диагностические тесты и стандартизированы методики тестирования. В СССР методику постановки ИФА для диагностики сифилиса разработали B.Н.Беднова, А.В.Бабий и А.В.Котровский (1982, 1983).

2. Принцип метода ИФА

Иммуноферментный анализ (ИФА) по механизму реакции близок к РИФ (выявляются те же антитела). Реакцию иммуноферментного исследования относят к иммунологическим реакциям, основанным на высокоспецифическом взаимодействии антигенов бледной трепонемы с антителами больного сифилисом.

В сифилидологической практике используется в основном непрямой вариант ИФА. Принцип наиболее часто используемого непрямого варианта реакции состоит в следующем. На поверхности лунок полистиролового планшета фиксируются иммунные комплексы, образующиеся при взаимодействии антител больного сифилисом с антигенами бледной трепонемы. После этого их выявляют их в цветной реакции с помощью специфических коньюгатов и соответствующих субстратно-хромогенных добавок.

Порядок выполнения теста следующий: на твердофазный носитель с присоединенным к нему антигеном помещается сыворотка больного. При наличии в ней антител, на поверхности носителя образуется комплекс антиген-антитело. Для «проявления» результатов реакции используются антивидовые антитела к Ig человека, конъюгированные с ферментными маркерами. В случае положительной реакции фермент, присоединившийся к комплексу антиген-антитело, разлагает добавленный в систему субстрат, в результате чего развивается цветное окрашивание разной интенсивности.

В реакции определения комплекса сорбированных на твердой фазе АГ и АТ проводят с помощью антиглобулиновых антител, меченных ферментом, по цветной реакции фермента с субстратом.

В реакции определение комплекса сорбированных на твердой фазе антигенов и антител проводят с помощью антиглобулиновых антител, меченных ферментом.

ИФА представляет возможность выявления сывороточных Ig разных классов. На рынке представлены системы, позволяющие определять раздельно IgM и IgG и суммарные антитела.

Специфические антигены, применяемые для ИФА, могут иметь различное происхождение:

ультраозвученные - их получают при результате разрушения бактериальной клетки T.pallidum ультразвуком или иным методом;

рекомбинантные - их получают генно-инженерными технологиями путем внедрения в геном бактериальной клетки (например, кишечной палочки E.Coli) гена, ответственного за синтез определенного антигена T.pallidum, с последующим наращиванием бактериальной массы продуцирующего микроорганизма, разрушением этих клеток, выделением и очисткой антигена;

пептидные - получают в результате последовательного химического синтеза антигенных эпитопов белков T.pallidum.

Организм способен образовать антитела почти к любой части молекулы антигена. При нормальном иммунном ответе этого обычно не происходит. Один или несколько иммуногенных пептидов, выделенных из белкового антигена обладают особой антигенностью, и большинство антител образуется именно к ним. На них развивается наиболее интенсивный иммунный ответ. Наибольшую информативность в ИФА показали иммунодоминантные участки белков бледной трепонемы с молекулярной массой 15 кД, 17кД и 47кД. В качестве антигена использовали детергентный экстракт, или соникат патогенных трепонем штамма Никольс.

3. Способ проведения исследований методом

Принцип метода заключается в выявлении сорбированного на твердой фазе (поверхность лунок пластикового планшета) специфического комплекса антиген-антитело антиглобулиновыми антителами, меченными ферментом (пероксидазой), с помощью цветной реакции с субстратом, учитываемой количественно спектрофотометрически.

Антигены, применяемые для сенсибилизации лунок полистиролового планшета могут быть:

• лизатными - полученными в результате разрушения ультразвуком бледной трепонемы;
• пептидными - полученными в результате химического синтеза фрагментов белков бледной трепонемы и имеющими антигенную реактивность, аналогичную исходным белкам возбудителя;
• рекомбинантными - полученными с помощью методов генной инженерии, несущими антигенные детерминанты, идентичные бледной трепонеме.

В сифилидологической практике обычно используется непрямой вариант ИФА.

4. Учет результатов

При ИФА для визуализации реакции антиген-антитело используют реакцию фермента (щелочная фосфатаза или пероксидаза хрена) с субстратом, который при этом меняет свою окраску. Интенсивность окраски определяет позитивность реакции (от «–» до «++++»). Результаты ИФА могут оцениваться визуально по 4-бальной системе или инструментально в виде цифровых показателей оптической плотности, получаемых на специальных ридерах (типа Мультискан) при длине волны 492 нм. Т.к. оценка результатов проводится спектрофотометрически, это исключает субъективную интерпретацию.

5. При каких периодах заболевания лучше использовать

Сроки позитивации ИФА - с 4-ей недели от заражения. Результаты ИФА (как и РИФ) становятся положительными в первые дни первичного периода или в конце инкубации и остаются положительными во всех периодах. ИФА особенно ценен в ранней диагностике сифилиса – положительные результаты выявления антител могут быть получены уже в конце инкубационного периода заболевания (т. е. на 4–6-й неделе после инфицирования).

6. Чувствительность и специфичность

ИФА – высокочувствительный и специфичный тест, что является его преимуществом. ИФА по механизму реакции, чувствительности и специфичности близок к РИФ, т.к. в обеих реакциях принимают участие одни и те же антитела. Большинство исследователей отмечают высокую специфичность и чувствительность на всех стадиях болезни. Чувствительность различных вариантов ИФА, по данным Г. А. Дмитриева, достигает 98–100 %, а специфичность - 96–100 %. По данным ЦНИКВИ, чувствительность ИФА при сифилисе составляет 99,1% (Приказ № 87 М3 РФ).

Вариант твердофазного ИФА (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) относится к самым чувствительным серологическим реакциям, позволяя выявлять 0,0005 мкг/мл антител и 0,000005 мкг/мл антигенов.

7. Область применения метода

Метод рекомендуется использовать при обследовании беременных, контактных лиц, доноров и представителей групп риска. ИФА может применяться как в качестве скринингового, так и подтверждающего теста. За относительно короткое время своей истории, ИФА превратился из ориентировочного теста в подтверждающий. В диагностике сифилиса тест используется также как подтверждающий для образцов, демонстрирующих положительные результаты при использовании различных нетрепонемных тестов и РПГА.

Метод ИФА может быть использован в количественном варианте с расчетом индекса позитивности, или реактивности, который позволяет оценивать уровень антител в образце.

В настоящее время в России применение иммуноферментного анализа для диагностики сифилиса регламентировано Приказом Минздрава РФ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» (приложение №1 «Постановка отборочных и диагностических тестов на сифилис»). В приказе планируется замена РСК в комплексе серореакций (КСР) на ИФА и РПГА.

8. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Иммуноферментный анализ является сложным многоступенчатым исследованием, при котором необходимо строго соблюдать все рекомендации производителей диагностических наборов, правила регулировки и настройки применяемой в исследовании аппаратуры.

Источником ошибок при постановке ИФА могут являться следующие моменты:

Исследование в реакции гиперлипидемичной, гемолизированной сыворотки крови или образцов с признаками бактериального пророста;

Не практиковать двух- и более кратного замораживания образца биологического матери¬ала, при необходимости повторного исследования использовать сыворотку из пробирки-дубликата;

Нарушение сроков и условий хранения иммуносорбента и отмывающего раствора; использование тест-наборов с истекшим сроком годности;

Применение компонентов реакции из других диагностических наборов;

Нарушение времени проведения этапов реакции;

Высыхание лунок иммунологического планшета на этапах реакции;

Повторное использование пластиковой посуды (пластиковых лоточков) для приготовления смеси хромогена и субстрата;

Несоблюдение периодичности метрологического контроля параметров работы применяемых аппаратов (вошера и спектрофотометра);

Использование при постановке реакций загрязненной лабораторной посуды: колб, мерных цилиндров, пробирок, пипеток, наконечников пипеточных дозаторов;

Недостаточная тщательность выполнения разведений образцов биологического материала;

Ошибки при внесении образца биологического материала в соответствующую лунку планшета;

Ошибки при перенесении результатов исследования в журнал регистрации, протокол исследования или бланк ответа.

Тщательное выполнение рекомендаций инструкций по применению диагностических тест-наборов, регулярная поверка точности пипеточных дозаторов и автоматических приборов, применение внутреннего положительного и отрицательного контролей позволяют получать результаты ИФА-исследования с высокой воспроизводимостью.

9. Особенности, преимущества и недостатки

ИФА относится к современным, перспективным методам серодиагностики сифилиса ввиду его простоты, воспроизводимости, доступности. Определение антител методом ИФА является идеальным способом диагностики, подходящим для одновременного исследования большого числа образцов. Благодаря своим преимуществам, он завоевал популярность во всех странах.

Технология ИФА-исследования предусматривает соблюдение всех рекомендаций производителей коммерческих диагностических тест-наборов и тщательности выполнения процедуры исследования. Для проведения исследований в ИФА необходимо приобретение дополнительного специального оборудования. Методика постановки занимает более длительное время по сравнению с РМП, RPR и РПГА.

Наличие автоматизации ряда этапов или всего процесса в целом позволяет одновременно исследовать большое количество образцов биологического материала при высокой степени стандартизации исследования, минимизации субъективного элемента в оценке результатов, возможности хранения фиксированных протоколов исследования, что позволяет архивировать данные исследования и обращаться к ним повторно для ретроспективного анализа.

Достоинства:

• Дает возможность дифференцированного и суммарного определения IgM и IgG антител к возбудителю сифилиса.
• высокая чувствительность и специфичность, приближающиеся к 100%,
• воспроизводимость
• возможности автоматизации

К преимуществам ИФА относят высокую специфичность (96-100%) и чувствительность (98-100%), отмечаемые большинством исследователей.

Наличие автоматизации ряда этапов или всего процесса в целом позволяет одновременно исследовать поток с большим количеством образцов биологического материала при высокой степени стандартизации исследования, минимизации субъективного элемента в оценке результатов, возможности хранения фиксированных протоколов исследования, позволяющих архивировать данные исследования и обращаться к ним повторно для ретроспективного анализа.

Существенными недостатками методик, выполняемых вручную, в т. ч. определения антител к антигенам T. pallidum методом ИФА, являются:

~ возможные ошибки персонала при проведении исследования (оплошность, небрежность, нарушение технологии);

~ невозможность полной стандартизации процесса исследования при ручном варианте постановки ИФА;

~ повышенный риск заражения персонала.

10. Модификации метода

Наряду с классическим непрямым ИФА известен и метод ловушечного ИФА . Он был предложен в 1989 г. O. E. Ijsselmudien и соавт. для выявления антител класса IgM к антигенам Tr. pallidum. Метод обладает высокой специфичностью и чувствительностью.

На поверхности лунок планшета сорбированы очищенные антитела к иммуноглобулинам человека класса M, и после инкубации исследуемой сыворотки все IgM связываются с носителем. Наличие же среди связанных IgM специфичных для антигенов Tr. pallidum выявляется с помощью антигенов Tr. pallidum, конъюгированных с ферментом.

Этот метод позволяет выявлять антитела не только класса IgM, но и классов IgG, IgA. Для этого лунки планшетов сенсибилизируются аффинно очищенными антителами определенного класса против иммуноглобулинов человека. При этом из сыворотки вылавливаются антитела этого класса, а выявление трепонемоспецифических антител осуществляется путем их соединения с конъюгатом, представляющих соединение трепонемного антигена с ферментом.

Использование ловушечного варианта иммуноферментного анализа снижает риск ложноположительных реакций, опосредованных ревматоидным фактором крови, перекрестными реакциями между иммуноглобулинами классов М и G. При обследовании новорожденных в этом случае также исключаются ложноположительные результаты анализа, связанные с выявлением IgM, направленных против материнских антитрепонемных IgG.

В качестве вариантов ИФА за рубежом нашли широкое применение enzyme immune assay (EIA) и система ICE Syphilis . В последней в ячейках планшета сорбирована смесь антител к IgM и IgG, а также трех рекомбинантных белков T. pallidum. Положительные результаты тестируются в этой же тест-системе в двух повторах для выдачи окончательного результата.

В России был разработан ряд тест-систем для серодиагностики сифилиса методом ИФА с отечественными реагентами. Эти системы обладают высокой специфичностью и чувствительностью.

Помимо вышеперечисленных, существуют также другие варианты ИФА, в том числе допускающие прямое выявление возбудителя в крови (прямой ИФА), дот-ИФА с постановкой реакции на полосках нитроцеллюлозы, ИФА с капиллярной кровью, а также иммуноблоттинг, или Western Blot, с одновременным выявлением АТ к различным компонентам возбудителя.

Современной улучшенной модификацией ИФА является иммуноблоттинг.

ИХА (иммунохемилюминесцентный анализ), ИХЛ (иммунохемилюминесценция)

С развитием лабораторной диагностики в условиях модернизации здравоохранения РФ в практику лабораторий вошла автоматизация лабораторных исследований, которая позволяет стандартизовать аналитические этапы исследований. Это способствует повышению качества диагностики. С внедрением автоматизации стали применяться новые высокотехнологичные методы, обладающие высокой чувствительностью и специфичностью, такие как иммунохемилюминесцентный анализ (ИХА) (chemiluminescence immunoassay - CLIA)

Хемилюминесценция - процесс излучения фотонов при переходе электронно-возбужденных продуктов окислительных химических реакций в исходное энергетическое состояние. В ходе реакции хемилюминесценции выделяется значительное количество энергии, и квантовый выход излучаемого света достаточно высок. Из всех неизотопных методов хемилюминесценция обеспечивает наиболее высокую чувствительность. Для иммунометрических методов чувствительность хемилюминесценции на порядки превосходит чувствительность радиоиммуноанализа.

Метод иммунохемилюминесценции (ИХЛ) в настоящее время нашел свое применение при диагностике маркеров опухолей, аутоиммунных заболеваний, диабета, кардиомаркеров, гормонов (щитовидной железы, надпочечников, женских и мужских половых гормонов), torch-инфекций, вирусных гепатитов, вирусов группы герпеса.

На основе метода иммунохемилюминесценции разработан ряд высокочувствительных и специфичных (98-100%) тест-систем для диагностики сифилиса, применяемых в основном за рубежом.

В методе в качестве антигенов используются полученные генно-инженерными методами рекомбинантные липопротеины, которые являются полными аналогами антигенов T.pallidum.

Метод ИХА по результатам клинического исследования получил признание и рекомендован к применению в лабораторной диагностике сифилиса в Российской Федерации в качестве скринингового и подтверждающего теста при наличии в лабораториях соответствующего оборудования. В 2012 г. ИХА был включен в качестве скринингового и подтверждающего теста для диагностики сифилиса в Клинические рекомендации по ведению больных с инфекциями, передаваемыми половым путем, и урогенитальными инфекциями

Таким образом, использование высокотехнологичного ИХА, вошедшего в практику как мировой, так и отечественной лабораторной диагностики с внедрением автоматизации, обеспечивает следующие преимущества:

• исключение влияния субъективных факторов на аналитическом этапе исследования
• безопасность персонала при выполнении исследований потенциально инфицированного биологического материала
• повышение скорости получения результатов пациентом
• стандартизацию исследований и контроль качества исследования
• выдачу надежных достоверных результатов пациентам
• высокое качество клинических лабораторных исследований.

По чувствительности метод ИХА сопоставим с методом радиоиммунного анализа, а по простоте исполнения, безопасности для персонала и многим другим параметрам – превосходит его.

Метод ИХА, обладающий высокой чувствительностью и специфичностью (98–100%), дает возможность количественного определения уровня антител к возбудителю сифилиса, может быть использован для подтверждения сифилитической инфекции и скрининга. Ограничения применения: не может быть использован для контроля эффективности терапии, может давать ложноположительный результат.

Иммунохроматография (ИХГ).

Относительно новыми для использования в Российской Федерации являются методы выявления трепонемоспецифических антител, основанные на методах иммунохроматографии (ИХГ). Как и в методе ИХА, в качестве антигенов используются рекомбинантные липопротеины, полученные генно-инженерными методами (например: антигены Tp15, Tp17, Tp47) и биосинтетический пептид TmрА. Перечисленные антигены также используются в разных сочетаниях в составе иммуносорбентов в ИФА и иммуноблоттинге.

Метод ИХГ позволяет быстро определять содержание трепонемоспецифических антител к возбудителю сифилиса в образцах сыворотки и цельной крови без использования специального лабораторного оборудования и применяется при оказании первичной медико-санитарной помощи, в том числе по эпидемиологическим показаниям.

Ограничения применения: не может быть использован для контроля эффективности терапии,может давать ложноположительный результат.

ПБТ (простые быстрые тесты у постели больного)

Относительно недавно в серодиагностике сифилиса начало развиваться направление по разработке так называемых простых быстрых тестов (ПБТ), или тестов у постели больного (Point-of-care - РОС). Простые быстрые тесты у постели больного, или иммунохроматографические тесты позволяют проводить быстрое определение содержания трепонемоспецифических антител к возбудителю сифилиса в образцах сыворотки и цельной крови без использования специального лабораторного оборудования и применяться при оказании первичной медико-санитарной помощи, в том числе по эпидемиологическим показаниям. Ограничения применения: не могут быть использованы для контроля эффективности терапии, могут давать ложноположительный результат.

Эти тесты основаны на иммунохроматографическом определении антител к трепонемным антигенам бледной трепонемы я выполняются на стрипах; при этом можно использовать как цельную кровь, так и сыворотку (Herring A., Ballard R. et al, 2006). Формат тестов позволяет проводить исследования при отсутствии специального оборудования и без использования электричества. Однако ввиду относительно невысокой чувствительности и специфичности эти тесты пока не находят своего широкого применения в практике.

Иммуноблотинг (Western Blot)

В последние годы появились методы исследования, направленные на обнаружение и анализ содержания антител к каждому антигену бледной трепонемы раздельно. Один из таких методов - это метод иммунного блота (или блоттинга, имммуноблотинга, Western blot), который применяют для определения IgG- либо IgM-антител к бледной трепонеме. Метод иммуноблоттинга является модификацией иммуноферментного анализа - вариантом ИФА.

Имммуноблотинг является одним из самых современных методов серодиагностики сифилиса и активно используется за рубежом. Свое название ("западный блоттинг") он получил в качестве юмористического ответа на названия техник определения ДНК ("южный блоттинг") и РНК ("северный блоттинг").

1. История метода

Иммуноблоттинг (Western blot) используют для определения IgG- либо IgM-антител к антигенам бледной трепонемы (Herremans М. et al., 2007).

2. Классический иммуноблот

Классический иммуноблот (Western Blot Analysis) сочетает в себе иммуноферментный анализ и применение электрофоретического метода. Белки-антигены возбудителя сифилиса предварительно разделяют методом электрофореза и переносят на носитель - нитроцеллюлозную мембрану (стрип). Этот перенос и называется блоттингом. Затем этот носитель с разделенными точками (blots), обрабатывают исследуемой сывороткой и антителами к IgG или IgM, меченными ферментами либо радиоактивными веществами. Метод предполагает использование природных или рекомбинантных белков трепонемы.

Электрофорез - это разделение заряженных соединений на основе их подвижности в электрофоретическом поле. При наложении разности потенциалов в какой-то среде положительно заряженные молекулы движутся к отрицательно заряженному электроду, а отрицательно заряженные - к положительному электроду.

Большинство глобулярных белков собраны таким образом, что большая часть заряженных групп, а именно гидрофильных, расположена на поверхности белка, тогда как незаряженные, гидрофобные остатки погружены во внутрь глобулы. В электрическом поле в соответствии со своим зарядом белки мигрируют по направлению к противоположно заряженному электроду.

Электрофоретическое разделение белков производят в синтетический гелевой среде на основе полиакриламида. Для разделения белков в соответствии с их молекулярной массой перед началом электрофореза белковую смесь преинкубируют в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН).

Детальные исследования зарубежных ученых Weber и Osborn (1969) показали, что после такой обработки единственным фактором, который может повлиять на подвижность белков в полиакриламидном геле (ПААГ) является размер белка, а точнее его молекулярная масса. Это позволило применить метод электрофореза в ПААГ в присутствии ДСН для достаточно точного определения молекулярной массы белков и пептидов. В зарубежной литературе этот метод был назван SDS-PAGE (sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis).

Профиль реактивности в классическом WB-тесте с природными антигенами (метод электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия). (1) - контрольный положительный результат, (2) - контрольный отрицательный результат, (3-6) - клинические образцы.

В тестах на сифилис с помощью данного метода, предварительно очищенная и разрушенная до составных компонентов бледная трепонема подвергается электрофорезу в полиакриламидном или агарозном геле. При этом входящие в ее состав антигены разделяются по молекулярной массе.

Затем методом вертикального электрофореза антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый глазом спектр антигенных полос, характерный для бледной трепонемы.

При проведении анализа на нитроцеллюлозную полоску (стрип) наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и др.). Если в пробе есть специфические антитела, то в процессе инкубации они прочно связываются со строго соответствующими (комплементарными) им антигенными полосами и образуют комплекс “антиген – антитело”.

После удаления несвязавшихся иммуноглобулинов во время отмывания стрипа следует инкубация с конъюгатом – меченными ферментом антителами к иммуноглобулинам человека (антитела к IgG или IgM человека), в ходе которой на поверхности мембраны происходит присоединение к имеющимся комплексам “антиген – антитело” антител, меченных ферментом.

После удаления несвязавшегося конъюгата в ходе инкубации с раствором субстрата происходит взаимодействие фермента с субстратом, в результате чего развивается цветная реакция – окрашивание участков мембраны (в виде полос), где располагаются отдельные антигены бледной трепонемы, антитела к которым находились в исследуемой сыворотке. Интенсивность окрашивания зависит от количества связавшихся антител из сыворотки. Результат реакции оценивается визуально.

Наличие полос на определенных участках нитроцеллюлозной пластины подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определенным антигенам бледной трепонемы.

Определяемые с помощью этого метода иммунодетерминанты 15, 5, 17, 44,5, 47 кД обладают диагностической значимостью при сифилисе. Ig G-иммуноблоттинг по чувствительности и специфичности подобен РИФ с абсорбцией (РИФ abs). Ig М-иммуноблоттинг может служить диагностическим тестом для врожденного сифилиса.

3. Иммуноблот в формате линейного иммунного анализа

Линейный иммунологический анализ (line immunoassay, LIA) позволяет одновременно определять антитела к антигенам бледной трепонемы в сыворотке или плазме крови человека. Антигены заранее нанесены на тест-полоски (стрипы), которые поставляются в составе коммерческих диагностических наборов.

Стрипы изготавливаются из нитроцеллюлозной мембраны, полиамидной с пластиковой подложкой или нейлоновой мембраны с пластиковой основой. При изготовлении, на тест-полоску помещают несколько дискретных антигенов в виде отдельных антигенных линий. Помимо этих антигенов сифилиса, на каждую полосу наносятся еще четыре контрольных линии: стрептавидин и контрольные пробы (3 + , 1 + и ± линия среза).

Для полосок используются искусственные антигены, полученные генно-инженерными способами - рекомбинантные белки или синтетические полипептидные конструкции. Это аналоги поверхностных антигенов бледной трепонемы - TpN15, TpN17, TpN47 и TmpA с молекулярной массой 15, 17, 47 kDа и 44,5 (ТmpА), где kDа=kiloDaltons. С их помощью определяют сывороточные антитела к различным иммунодоминантным компонентам возбудителя.

Инкубация испытательного образца проходит в кювете, куда также помещается индикаторная полоса. Антитела к T. рallidum определяются по связыванию с антигенами, нанесенными на тест-полоски. Если в образце имеются специфичные для T. pallidum антитела, они образуют связи с отдельными линиями антигенов. При взаимодействии антител, содержащихся в испытуемой сыворотке, с дискретными антигенами Т. pallidum, помещенными тест-полоску, образуется комплекс антиген-антитело в виде визуально определяемых цветных полос.

При учете результатов иммуноблотинга оценивают реактивность сыворотки к каждому из антигенов в отдельности. Суммарный положительный ответ выдается при получении результата одновременно с двумя или тремя из представленных антигенов.

Исследовательские процедуры проводятся вручную или на специальном анализаторе, с интерпретацией результатов с помощью специализированной компьютерной программы для инфекционных заболеваний.

За счет высокой степени очистки рекомбинантных антигенов и одновременного выявления антител к наиболее иммуногенным детерминантам возбудителя сифилиса, метод обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

4. Учет результатов

Для считывания интенсивности окрашивания антигенных полос на стрипах разработаны фотометры, работа которых основана на отражении сигнала, что исключает субъективную оценку и дает потенциальную возможность автоматизации.

5. При каких периодах заболевания лучше использовать

Тесты, использующие метод иммуноблоттинга, могут определять специфические антитела к антигенам бледной трепонемы на очень ранней стадии заболевания. Наиболее значимыми в диагностике сифилиса являются антитела к антигенам бледной трепонемы TpN15, TpN17, TmpA и TpN47. Эти антигены - мембранные белки, имеющие молекулярную массу 15, 17, 44,5 и 47 кДа соответственно.

При внедрении в организм человека бледной трепонемы, противосифилитические антитела появляются в таком порядке: сначала развивается иммунный ответ к антигенам TpN17, затем к TpN47, после TpN15 и позже всех TmpA. При учете результатов теста оценивают реактивность сыворотки к каждому из них в отдельности. Например, когда в линейном блоте имеется реактивность только к антигенной линии TpN17 и TpN47, это означает, что болезнь в начальной стадии. Чем больше антигенных линий становятся реактивными, тем дальше развивается инфекция. При лечении сифилиса картина реактивности в этом тесте меняется.

Определение IgM к протеинам с молекулярной массой 15,17, 41, 47 кДа позволяют выявить 29,2% больных при вторичном сифилисе, 12,5% – при раннем скрытом сифилисе и 8,0% – при серорезистентности. Поиск IgG к тем же молекулам характеризуется чувствительностью 61,6% при серорезистентности и 100% при вторичном и раннем скрытом сифилисе.

6. Чувствительность и специфичность

Согласно данным литературы, чувствительность и специфичность теста очень высокие - 99,6-100 и 99,3-99,5 % соответственно. В классическом методе это достигается за счет электрофоретического разделения белков, глико- и липопротеинов и максимальной специфичности детектирующих иммунных сывороток или моноклональных антител. В оптимально отработанных условиях с помощью иммуноблоттинга можно обнаруживать антиген в количествах менее 1 нг в испытуемом объеме.

Чувствительность линейного блота также составляет 99.6%, а специфичность находится в диапазоне между 99.3% и 99.5%.

По оценке специалистов иммуноблоттинг с рекомбинантными высокоспецифичными антигенами по чувствительности и специфичности аналогичен РИФ-абс.

Согласно данным зарубежной литературы и результатам изучения в ЦНИКВИ, метод иммуноблоттинга обладает при диагностике сифилиса высокой чувствительностью (98,8-100%) и специфичностью (97,1-100%).

7. Область применения метода

Иммуноблотинг (иммуноблот) является высокоспецифичным и высокочувствительным референтным методом. Высокие чувствительность и специфичность позволяют рассматривать этот метод как подтверждающий тест на сифилис. Метод может применяться для подтверждения диагноза, а также в случае, если другие трепонемные тесты дают сомнительные и противоречивые результаты. С помощью иммуноблоттинга можно подтвердить диагноз у пациентов с положительными или неопределенными результатами анализов, полученных в том числе и при помощи РПГА или ИФА.

8. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Ложноположительные результаты очень редки. Ложноотрицательные результаты бывают также достаточно редко и наблюдаются у больных с иммунодефицитами – чаще у ВИЧ- инфицированных и при эффекте диагностического «окна» из-за задержки синтеза антител, а также при ошибках на этапе постановки.

Использование современных тест-систем диктует точное соблюдение всех требований, предъявляемых как к материалу, так и к выполнению постановки реакции. В основном, источник ошибок - нарушение порядка и технологии проведения исследования (особенно для классического вестерн-блота), несоблюдение рекомендаций производителей тест-наборов. . Ошибки могут быть также допущены при сборе, доставке, хранении проб сыворотки крови, а также при выполнении тестов. Помимо испорченных образцов, среди других возможных причин - использование тест-наборов с истекшим сроком годности, а также ошибки при анализе результатов исследования.

9. Особенности, преимущества и недостатки

Уникальность иммуноблота заключается в его высокой информативности и достоверности результатов.

Тест не требует высокоочищенных антигенов, референтных и контрольных сывороток. Идентификация мишени антител основана на молекулярном весе белка, с которым реагируют антитела из сыворотки пациента. В одной реакции может быть обнаружено связывание антител с несколькими антигенами, каждый из которых может быть точно охарактеризован. За счет этого иммуноблоттинг обладает рядом преимуществ перед другими методами выявления антител, результаты которых зависят от стандартизации, чувствительности, качества субстрата, нестабильности или нерастворимости определенных антигенов

Метод легко воспроизводим, относительно прост в исполнении и интерпретации результатов, дает возможность определять спектр антител сразу к нескольким антигенам Т. pallidum и оценивать вклад в общую реакцию антител различной специфичности.

Применение высокоочищенных рекомбинантных и пептидных антигенов снижает до минимума неспецифическую реактивность сывороток. Использование метода дает возможность отказа от трудоемких и субъективных методов, представляющих опасность для исследователя (перевивка штаммов Г. pallidum, работа с патогенной Т. pallidum при постановке реакции). Это определяет предпочтение метода иммуноблоттинга перед другими трепонемными тестами (РИФ и в особенности РИБТ) для диагностики сифилиса.

10. Модификации метода

Существует несколько коммерческих тест-систем на основе данного метода. Одни из них выполнены в формате вестерн-блота , состоят из стрипов, на которые перенесены белковые компоненты T. pallidum, предварительно разделенные электрофорезом в полиакриламидном геле.

Другие выполнены в формате линейного блота , состоят из стрипов, на которых в виде дискретных линий сорбированы рекомбинантные и синтетические полипептиды - аналоги поверхностных антигенов T. pallidum, TpN15, TpN17, TpN47 и TmpA.

Результаты вестерн-блота труднее интерпретировать, так как на стрипах выявляется большое разнообразие антител, многие из которых являются группоспецифическими. Напротив, интерпретация результатов линейного блота не вызывает затруднений; кроме того, дополнительные контрольные линии, нанесенные на стрип, позволяют проводить полуколичественную оценку уровня антител к четырем антигенам T. pallidum.

xMAP-технология

хМАР - современная технология, позволяющая проводить многопараметрические исследования путем одновременной детекции множества аналитов в одном биологическом образце. В качестве твердой фазы используются окрашенные микросферы, покрытые захватывающими реагентами (олигонуклеотидами, антителами, антигенами).

Исследуемый образец добавляется к раствору, в котором содержатся микросферы. Выявляемые в образце аналиты связываются с соответствующей микросферой, после чего в раствор вносится детектирующий агент (детектирующие антитела, флюоресцентная метка). Для детекции определяемого аналита используется система двух лазеров, позволяющих проводить как качественную оценку наличия аналита в пробе (для этого используется красный лазер, классифицирующий микросферы по цвету), так и количественную оценку содержания аналита в пробе (для этого используется зеленый лазер).

Исследование осуществляется в автоматическом режиме на анализаторах типа Bio-Plex 200 (bio-rad), Bio-Plex2200 (bio-rad), Luminex100 (luminex), Luminex200 (luminex) снабженных программным обеспечением.

Ппроизводительность xMAP-технологии значительно превышает показатели классического твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) при существенно меньшем объеме биоматериала.

хМАР-технология, обладающая высокой аналитической чувствительностью, в настоящее время используется для решения широкого круга клинических задач. С ее помощью в одном образце биологического материала осуществляется одновременная детекция известных онкомаркеров, кардиомаркеров, маркеров острой фазы и сахарного диабета, широкого спектра цитокинов, хемокинов, факторов роста. Одномоментное выявление множества аналитов в одном биологическом образце позволяет существенно сократить время обследования пациента. К настоящему времени разработан ряд тест-систем для выявления антител к возбудителям ИППП, в частности сифилитической инфекции, методом хМАР.

"На Самотечной"
Прием по предварительной записи! Суббота, воскресенье.

Диагностика сифилиса – крайне важная задача для врачей-инфекционистов, поскольку для определения масштабов распространенности заболевания полное обследование пациентов не проводится. Это требует больших финансовых и временных затрат, к тому же клинические методы часто неинформативны. На сегодняшний день медицина располагает современными способами диагностики. На данный момент в лабораторной практике широко распространены так называемые экспресс-тесты, основанные на определении в крови сифилитических антител. К ним относятся РМП (реакция микропреципитации) и РПГА (реакция пассивной гемаглютинации).

Реакции на разных стадиях заболевания

Treponema pallidum - возбудитель сифилиса

Сифилис – длительно протекающее венерическое заболевание, характеризующееся стадийностью течения и способностью поражать абсолютно все органы и ткани человека. Возбудителем является микроорганизм Treponema pallidum – бледная трепонема.

Источник инфицирования – больной человек.

Исходя из путей заражения сифилисом (половой, контактно-бытовой, гемотрансфузионный, трансплантационный и трансплацентарный), экспресс-тесты могут быть назначены:

• после случайного полового контакта с необследованным партнером;
• если лечащему врачу становится известно о факте заражения кого-либо из членов семьи, полового партнера обследуемого человека;
• если пациенту недавно проводились переливания цельной крови или пересадка органов;
• в случае обнаружения возбудителя заболевания у родившей матери.

В соответствии с принципами действия, на которых основаны реакции пассивной гемагглютинации и микропреципитации, на каждой стадии течения сифилисаэ ффективным будет определенный тест.

Стадия	Описание	Изображение
Первичная	Основной диагностический критерий – наличие твердого шанкра. Он является своеобразным индикатором, позволяющим определить входные ворота инфекции. В случае, когда он возникает в области гениталий, следует судить о половом пути проникновения возбудителя в организм человека. Если твердый шанкр появляется на красной кайме губ – значит, был контакт между здоровым человеком и зараженным. Образование представляет собой безболезненный при пальпации воспалительный очаг (эрозия или язва), располагающийся на плотном основании. Твердые шанкры содержат большое количество бледных трепонем. 3-5 недель спустя в сыворотке крови возникают антитела – соединения плазмы крови белковой природы, препятствующие размножению микроорганизмов. Именно на определении в сыворотки крови специфических антител к сифилису построена большая часть экспресс-методов диагностики. Определение заболевания на первичной стадии развития проводится при помощи реакции микропреципитации	Твердый шанкр на языке, свидетельствующий о проникновении возбудителя через поцелуй - бытовой путь передачи
Вторичная	Характеризуется появлением «ожерелья Венеры», бледно-пятнистой сыпи, возникающей вследствие генерализованного поражения кожных покровов и слизистых оболочек. Возможна локальная потеря волос, вплоть до облысения. На данной стадии болезни пациенты нередко предъявляют жалобы на легкое недомогание, повышение температуры тела до 37,7 °C, появление слабости, насморка, кашля или конъюнктивита. Довольно часто «ожерелья Венеры» нет, а вторичный сифилис практически никак себя не проявляет, способствуя переходу в следующую, хроническую стадию. Серологические реакции также положительны. Для определения заболевания на данном этапе применяется как РМП, так и РПГА	"Ожерелье Венеры"
Третичная	Является самой тяжелой стадией, склонной к рецидивам с длительным течением на протяжении многих лет. Для данного периода характерно развитие гумм – сифилитических гранулем, склонных к некрозу и грубому рубцеванию. Гуммы способны образовываться в любых тканях и органах, в том числе внутренних. Трепонемы обнаруживаются не всегда – серологические реакции положительны примерно в 70% случаев. Наиболее однозначный ответ о наличии антител дает реакция прямой гемагглютинации

Анализ крови на сифилис - реакция Вассермана

РПГА

Реакция пассивной гемаглютинации - один из наиболее специфических и чувствительных серологических методов диагностики сифилиса.

Оценка результата РПГА

Основные характеристики и особенности проведения РПГА указаны в таблице.

Характеристика	Описание
Материал исследования	Образец венозной крови
Механизм действия	Реакция непрямой гемагглютинации развивается в случае, если эритроциты – красные кровяные клетки, на поверхности которых располагаются антигены бледной трепонемы, склеиваются при контакте сыворотки крови зараженного сифилисом человека
Эффективность	Исследованиями доказано, что по специфичности и чувствительности реакции к возбудителю заболевания данный метод является одним из самых точных серологических анализов
	При добавлении к исследуемому биологическому материалу сыворотки с антителами к трепонеме наблюдается агглютинация (склеивание) эритроцитов, выпадающих в осадок в виде зонтика. Также на количество агглютинированных эритроцитов влияет концентрация сывороточных антител. Положительная реакция РПГА свидетельствует о присутствии Treponema pallidum в крови обследуемого
Показания для проведения исследования	Лечащий врач назначает сдачу анализа крови на РПГА в следующих случаях: клинические проявления сифилиса (твердый шанкр, «ожерелье Венеры», гуммы и т. д.); отсутствие клинических проявлений, но возможное инфицирование вследствие контакта с больным человеком; подготовка к донорской сдаче крови; возникновение необходимости прохождения обследования для оформления или продления медицинских книжек; дообследование пациентов с положительной реакцией скринингового теста; госпитализация пациента в стационар и предоперационное обследование
Чувствительность	на стадии первичного сифилиса порядка 80%; вторичного и третичного – 90-98%
Специфичность	Высокая специфичность (98-100%) дает возможность назначать анализ для подтверждения сифилиса в случае положительной реакции микропреципитации или других аналогичных обследований
Ложные результаты	Частота ложноположительных результатов относительно невелика и по данным различных исследователей составляет порядка 0,05-2,5%. Возникновение ложноположительных результатов у лиц, не инфицированных сифилисом, связано со следующими факторами: наличие системных заболеваний соединительной ткани; аналогичные бледной трепонеме возбудители в сыворотке пациента; соматические заболевания (инфаркт миокарда, гепатиты различной этиологии и пр.); ВИЧ-инфекция; обширные травмы и переломы; беременность; инъекционный прием наркотических средств; онкопатологии и др.
Отрицательный результат	Может быть получен в случае, если: человек здоров; анализ проведен некорректно; анализ проведен в течение первых 2-4 недель, когда антитела не определяются

Если человек хотя бы раз был болен сифилисом, реакция РПГА будет оставаться положительной в течение всей его жизни.

Для того, чтобы избежать ложноположительных результатов, нужно придерживаться следующих рекомендаций при подготовке к сдаче анализа:

• забор материала проводится строго натощак;
• в день сдачи крови разрешается пить негазированную минеральную воду в минимальном объеме;
• перед проведением анализа на несколько часов следует отказаться от курения и полностью исключить прием алкогольных напитков;
• в случае, если пациент принимает лекарственные препараты, ему надо уведомить об этом своего лечащего врача.

При получении положительного результата показано немедленное обследование членов семьи и половых партнеров инфицированных лиц с целью предотвращения дальнейшего распространения инфекции.

РМП

Реакция микропреципитации (РМП) различной интенсивности

С помощью анализа под названием реакция микропреципитации (РМП) специалист определяет антитела, образующиеся на стадии первичного сифилиса. Титр антител к инфекции выявляется в крови больного уже на 7-10 день после возникновения твердого шанкра.

Характеристики и особенности проведения РМП указаны в таблице.

Критерий	Описание
Материал для обследования	Сыворотка крови, соскоб с поверхностей язв и эрозий, жидкость из лимфоузлов
Чувствительность	Колеблется в диапазоне 80-95%, зависит также от стадии заболевания
Расшифровка и положительный результат	К исследуемому образцу крови добавляют антиген - фосфолипид кардиолипин, получаемый из бычьего сердца. Сифилис-неспецифические антитела образуют реакцию с липидом. Положительный результат свидетельствует о наличии Treponema Pallidum или сходных возбудителей в исследуемом материале. Интенсивность проведенной реакции (от 1 до 4) указывает на степень заражения
Эффективность	Преимущество метода РМП в том, что он позволяет диагностировать сифилис на начальном этапе инфицирования
Показания для назначения исследования	Анализ сдают в следующих случаях: поступление больного в стационар; предоперационное обследование; анализ крови будущих доноров, беременных; подозрение на сифилис; контроль проведенной медикаментозной терапии; ребенок рожден от матери, инфицированной сифилисом
Ложноположительный результат	Возникновение ложноположительных результатов возможно в следующих случаях: сахарный диабет; ВИЧ-инфекция и СПИД; вирусные гепатиты; другие инфекционные заболевания; иногда беременность
Отрицательный результат	Свидетельствует об отсутствии заболевания, либо возможен в первые несколько дней, когда титра антител еще нет

Так же, как и в случае РПГА, для исключения ложноположительных результатов, перед тем как сдать анализ, необходимо:

• перед забором крови рекомендуется пить строго негазированную, несладкую воду;
• накануне сдачи анализа исключить употребление жирной, острой и жареной пищи;
• ни в коем случае не употреблять алкоголь;
• избегать повышенных физических и эмоциональных нагрузок;
• при наличии лекарственного средства, которое пациент вынужден принимать в связи с какой-либо терапией, следует предупредить врача, направившего на данное обследование.

Реакция микропреципитации – один из первых анализов, назначаемых для диагностики заболевания. Для получения более точных данных назначается аналогичное исследование, например, РПГА.

В любом случае расшифровка анализов оценивается в сочетании с результатами основного клинического обследования.

Своевременно проведённый анализ выявляет патологию на ранней стадии развития, что облегчает борьбу за здоровье пациента. Не каждый обыватель знает, что за анализ РПГА указан в бланках с результатами, и как его расшифровать.

Получить направление на анализ крови с аббревиатурой РПГА может любой человек, так как это распространённое исследование для людей, которым необходимо пройти медицинскую комиссию для трудоустройства либо перед операцией. Необходимо женщинам, планирующим встать на учёт по беременности.

РПГА-анализ крови: расшифровка

Лечащий врач назначает проведение анализов, в числе которых таинственная аббревиатура РПГА. Что такое РПГА в бланках анализов крови? Под этой аббревиатурой понимают особую реакцию, используемую в микробиологии и иммунологии и позволяющую выявить пассивную (непрямую) гемагглютинацию (второе обозначение анализа – РНГА). Показатель выявляет возбудителей заболеваний инфекционного и венерического характера.

Внимание! Ни один анализ нельзя расценивать как 100% подтверждение диагноза. Для уточнения подозрений понадобится проведение дополнительных исследований.

Подробнее о видах анализов на сифилис можно узнать из видео ниже:

Возбудитель, обнаружение которого позволяет диагностировать поражение организма сифилисом, называется «бледная трепонема». Под его воздействием в ходе проведения анализа отмечено склеивание и выпадение эритроцитов в осадок. Такую реакцию называют агглютинацией красных кровяных телец.

Результаты лабораторного анализа

Механизм определения заражения несложен. Оказавшись в здоровом организме, бледная трепонема вызывает ответную реакцию, которая выражается в выработке антител к возбудителю. Выявление присутствия антител, являющихся иммунным ответом, и будет основанием для установления диагноза. Обнаружить их наличие в организме пациента возможно на 15-30 день с момента инфицирования. По этой причине специалисты для большей достоверности результатов советуют анализировать их в динамике.

Бледная трепонема – возбудитель сифилиса

Свидетельствовать о наличии либо отсутствии бледной трепонемы в организме человека могут два типа антител:

1. Нетрепонемный (неспецифический).
2. Трепонемный (специфический).

РПГА-анализ относится к серологическим методам лабораторной диагностики. Впервые его применили в 1965 году, и до нынешнего времени остается широко используемым методом исследования благодаря высокой чувствительности и способности определить стадию патологии. Серологические реакции – основание для установления наличия венерических заболеваний в организме. Реакция пассивной гемагглютинации относится к специфичным тестам. Тестами данного типа являются анализы:

• ПЦР, или полимерная цепная реакция. Позволяет выявить тСПИД (синдром приобретённого иммунодефицита), ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), уреаплазму половых органов, хламидиоз и многое другое.
• РИФ и РИБТ-анализы. Применяются для выявления скрытого сифилиса, не проявляющегося яркой симптоматикой.
• ИФА, или иммуноферментный анализ, позволяющий на основе изменения ферментной активности меток на антителах выявить аутоиммунные, венерологические и инфекционные заболевания.
• Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод для подтверждения диагнозов у людей с неопределёнными или положительными результатами таких тестов как РПГА и ИФА.

К нетрепонемным видам анализов, применяемых для выявления сифилиса в комплексе с остальными тестами, относится анализ РМП.

Стадии протекания заболевания

Благодаря результатам анализа крови пациента на РПГА можно выявить наличие возбудителя патологии и установить стадию заболевания. Выделяют 4 формы поражения сифилисом:

• латентная;
• первичная стадия;
• вторичная стадия;
• третичная стадия.

Расшифровку полученных результатов проводит квалифицированный специалист, который сделает выводы на основании анализа. Для первичной стадии заболевания показателен результат, обозначаемый парой цифр 1:320 (титры реакции), достоверность исследования на данном этапе составляет 86%. Однако такие показатели могут говорить о наличии скрытого сифилиса. На следующих этапах развития патологии диагностическая точность исследования выше и достигает 100%.

В некоторых случаях возможно получение ложноположительного результата. Количество ложноположительных реакций не превышает 2,5% от общего числа лабораторных анализов, а обычно ниже. Положительный результат анализа РПГА у пациентов, не страдающих сифилисом, возможен при следующих обстоятельствах и отклонениях:

• Наличие антител к иным возбудителям, схожим с бледной трепонемой.
• Наблюдение ВИЧ-инфекций, гепатитов C или B.
• При значительных травмах и обширных переломах.
• При заболеваниях онкологического характера.
• Системные патологии соединительной ткани.
• Результат могут искажать некоторые заболевания (туберкулёз, брюшной тиф).

Важно! На РПГА 2 анализ крови, ИФА положительная расшифровка наблюдается на протяжении всей жизни у пациентов, переболевших сифилисом в прошлом. Данный результат анализа для бывших пациентов – норма.

РПГА-анализ и другие инфекционные заболевания

Анализ крови на РПГА, расшифровка которого важна для диагностирования сифилиса, даёт возможность выявления и других инфекций. Сдавать его понадобится людям с подозрением на сальмонеллез – острая кишечная инфекция, возбудителями которой служат сальмонеллы.

Возбудитель сальмонеллеза

При развитии заболевания у больного наблюдается интоксикация и поражение структур желудочно-кишечного тракта. В зависимости от клинической формы, в которой протекает патология, наблюдаются симптоматические проявления:

• рвотная реакция;
• нарушения стула (становится жидким, приобретает неприятный запах, возможно появление примесей крови или слизи);
• болезненные ощущения в области живота;
• повышение температуры и озноб;
• нарушение водно-солевого баланса в организме, что отрицательно влияет на самочувствие пациента, и т.д.

Анализ с коревым маркером – альтернатива для диагностирования кори, вызывающей поражения слизистой зрительных органов, дыхательных путей и полости рта. Патологии сопутствует тяжёлая интоксикация и сыпь на кожных покровах больного.

Высыпания на коже ребёнка при кори

Метод РПГА-исследования позволяет выявить антитела против возбудителя столбняка. Столбняк – острая инфекционная патология, возбудитель которой может попасть в организм при нарушении целостности кожных покровов и слизистых оболочек, использовании нестерильных материалов в медицинских учреждениях и т.д.

Клиническими признаками заболевания являются симптомы:

• Повышенный тонус мышц (ригидность).
• Ухудшение общего состояния, недомогание и повышенная раздражительность, ухудшение аппетита.
• Судороги лицевых мышечных тканей.
• Боль тянущего характера вокруг места поражения.
• Угнетение глотательной функции.

РПГА, ПЦР и ИФА-тесты используются на разных этапах коклюша при диагностировании. При этом заболевании на начальной стадии зачастую отсутствуют прямые симптомы, что отодвигает по времени возникновение подозрений на инфицирование.

Температурные показатели организма могут меняться, но способны оставаться и на нормальном уровне. Со временем появляется кашель, который позже приобретает приступообразный и спазматический характер.

Коклюш у детей

Подготовка к сдаче анализа и порядок проведения

Для проведения анализа у пациента будет взят образец крови из вены. Чтобы в полученных результатах не возникало сомнений, врач дает рекомендации:

• Сдавать анализ на голодный желудок, процедура проходит в утреннее время, что позволяет добиться 8 часов с момента последнего приёма пищи.
• Желательно не курить за несколько часов до забора материала для анализа.
• Употребление спиртных напитков исключить.
• При употреблении медицинских препаратов предупредить лечащего врача, который даёт направление на анализ.

Забор крови на исследование

Проведения РПГА-исследования не стоит бояться или стесняться. Ведь анализ назначается людям с явными признаками венерических заболеваний и при бытовой необходимости. Список показаний к обследованию обширен:

• Полное обследование – необходимое условие перед проведением хирургических операций.
• Перед госпитализацией на стационарное лечение.
• Обязательно для людей, желающих стать донорами.
• Входит в список обследований, необходимых для оформления санитарных книжек и трудоустройства.
• При наличии случаев прямого контакта с заражёнными людьми.
• В случае подозрений на такие заболевания, как корь, сальмонеллез, дифтерия, столбняк, коклюш и многие другие.
• При обнаружении характерной симптоматики сифилиса (увеличение лимфоузлов, высыпания язвенного типа и т.д.).

Анализ РПГА относится к широко используемым методам диагностики бактериологических патологий. При обращении к квалифицированному специалисту можно быть уверенным в своевременном определении заболевания и его успешном лечении. Будьте здоровы!

Титр 1 80 сифилис

Время полной негативации КСР в зависимости от стадии сифилиса при лечении экстенциллином, ретарпеном, по данным В.А. Аковбян, К. К. Борисенко, колебалось в пределах 1-3 до 10-12 мес (вторичный рецидивный и ранний скрытый сифилис).

Неспецифические (нетрепонемные) тесты показывают наличие антител к сифилису в крови. Титр от 1:2 до 1:320 говорит о том, что вы заражены сифилисом. На поздней стадии заболевания титр может быть низким. Ложноположительные результаты встречаются в 2 — 5% случаев при системных заболеваниях соединительной ткани, инфекционных заболеваниях, болезнях сердца, сахарном диабете, беременности, регулярном потреблении алкоголя и наркотиков, недавно проведенной вакцинации. Также в 10% случаев у людей, успешно излечившихся от сифилиса, результат МР может быть положительным на протяжении всей жизни.

3. Профилактическое лечение с целью профилактики врожденного сифилиса проводится в отношении беременных, болевших в прошлом сифилисом, получивших полноценную терапию, но не снятых с учета, а также беременных, получивших полноценное противосифилитическое лечение и снятых с учета по поводу сифилиса. Профилактическое противосифилитическое лечение назначают новорожденным, если они родились без клинических и серологических симптомов сифилиса от матерей неполноценно лечившихся в прошлом или не успевших получить полностью профилактическое лечение во время беременности.

Если в результатах анализа указано, что в крови обследуемого пациента обнаружены хламидии, титр которых составляет менее 10 3, но все же не полностью отсутствует, это ни в коем случае не означает, что опасности нет. Данные микроорганизмы являются абсолютно патогенными, т.е. в норме они не должны присутствовать у человека. В отличие от некоторых других возбудителей, носителем которых человек может являться продолжительное время, и так и не заболеть, хламидии менее 10 3 указывают на то, что пациент находится в острой фазе заболевания, а значит и он, и его половой партнер нуждаются в срочной антибактериальной терапии, под строгим медицинским контролем и с последующей сдачей необходимых анализов.

При диагностировании врожденного сифилиса в первые 2 мес после рождения стандартные серологические реакции у ребенка не определяют, т. к. они могут быть положительными за счет пассивной передачи реагинов через плаценту. По этой же причине не имеет значение и положительный результат РИБТ. Пассивно переданные от матери ребенку имобилизины самопроизвольно исчезают в течение 6 мес после рождения. Если ребенок инфицируется незадолго до родов, то в этом случае РИБТ будет еще отрицательной (в связи с более поздним образованием иммобилизинов), несмотря на наличие в организме ребенка сифилитической инфекции.

Диагностика сифилиса

Если проводить исследование на антитела каждого класса по-отдельности (например, с помощью высокоточного теста ИФА), то полученные положительные результаты можно истолковать следующим образом:

Беременные женщины

Серологическая диагностика сифилиса: как находят антитела к treponema pallidum

Результаты исследований наличия IgG антигена не ограничиваются лишь двумя пометками «отрицательный» или «положительный», в результатах исследования указывают ещё и титр антител, на которые ориентируется лечащий врач в период нахождения больного в стационаре, для оценки эффективности терапевтического воздействия. По величине титров можно сделать вывод и о текущем периоде инфицирования и успешности терапевтических мер. Так, титры свойственные первой стадии заболевания колеблются в пределах от 1:80 до 1:320. При переходе заболевания во вторичную стадию анализ на сифилис tpha покажет заметное повышение титров до 1:5120 с последующим понижением в латентном периоде до 1:80. После успешной терапии титры могут существенно понизиться, но будут оставаться положительными ещё долгие годы после выписки.

Что такое нетрепонемные тесты

Системные поражения соединительных тканей.

3. Подготовка к оперативному вмешательству;

При вторичном свежем сифилисе резко положительный результат по всем стандартным серологическим реакциям наблюдается почти в 100% наблюдений; титр реагинов наиболее высок — 1:160; 1:240 или 1:320. РИФ — 4+; РИБТ дает положительнй результат более чем у половины больных, однако процент иммобилизации трепо-нем невысок (40-60%).

В серологической лаборатории ставятся реакция Вассермана, реакция Ланге с коллоидным золотом, РИТ, РИФ, РИФЦ (реакция иммунофлуюоресценции с цельным ликвором), а также реакция ТРНА, либо реакция FTAABS, либо реакция IgM TPHA. Отрицательная реакция ТРНА, либо FTAABS исключает нейросифилис. Положительная реакция IgMTPHA со спинномозговой жидкостью и индекс ТРНА свыше 10 подтверждают наличие сифилитического процесса в ЦНС. Использование РИФ также целесообразно при лик-вородиагностике сифилиса. Особенно высокочувствителен и специфичен тест с цельным ликвором (РИФц). РИБТ со спинномозговой жидкостью по оценке результатов аналогична таковой при исследовании сыворотки крови. Применение РИФ РИБТ и IgM ТРНА расширяет возможности выявления сифилитического поражения нервной системы.

Эти реакции заложены в нас природой: человеческий организм никогда не оставляет без внимания вторжение микробов на свою территорию — в крови сразу вырабатываются антитела.

I gG (иммуноглобулины класса G) — это поздние антитела, которые также отвечают за общий иммунитет. Они обладают меньшими размерами и являются более специфичными (лучше подготовленными к уничтожению трепонемы), чем I gM .

В нашей стране методика постановки ИФА для серодиагностики сифилиса с отечественными ингредиентами разработана в отделе микробиологии ЦНИКВИ. При исследовании 1609 образцов сыворотки крови и спинномозговой жидкости выявлена чувствительность, составившая 95,2%, и высокая специфичность. Отрицательные результаты ИФА у полноценно леченных больных сифилисом могут служить критерием излечения (Дмитриев Г.А.). При автоматизированном учете результатов эта реакция используется для профилактического освидетельствования на сифилис больших групп обследуемых: доноров, беременных и др.

Лечение больных сифилисом осуществляется специфическими препаратами, к которым относятся трепонемоцидные антибиотики типа калиевой и натриевой соли бензилпенициллина, бициллин-1, бициллин-3, бициллин-5 и антибиотики резерва — эритромицин, тетрациклин, олететрин, эрициклин. Бензилпенициллин и его производные являются в настоящее время основными средствами лечения больных сифилисом. Применяют бензилпенициллин в виде натриевой (калиевой и новокаиновой) соли. Производными бензилпенициллина являются дюрантные препараты, т. е. препараты с пролонгированным терапевтическим действием. К ним относятся би-циллин-1, бициллин-3 и бициллин-5. Ранние формы сифилиса лучше поддаются лечению пенициллином, чем скрытые и поздние.

Чтобы диагностировать у человека сифилис, одного анализа мало. Как правило, обследование включает три теста: один неспецифический и два специфических. Как правило, назначают следующие серологические анализы: МР, РИФ и РПГА. По результатам этих тестов судят о том, болен ли человек и как давно произошло заражение. Рассмотрим возможные комбинации:

Тем не менее, существуют общепринятые нормы, зная которые, можно ориентироваться на результаты анализов. Однако еще раз важно обратить внимание, что окончательный диагноз либо его опровержение может быть установлено исключительно квалифицированным врачом, знакомым с полной историей болезни пациента.

Скрининг на сифилис

Положительный результат на сифилис после прохождения лечения

В случае обнаружения специфических антител к Treponema pallidum в TPHA тесте выдается результат «положительно», в графе комментарии указывается титр.

Эти белки организм «запоминает» и выделяет еще долгое время после проведенного лечения. У большинства переболевших — в течение нескольких лет, а у некоторых людей — даже в течение всей жизни. Однако эти антитела не дают полноценной защиты — после выздоровления повторное заражение сифилисом все равно остается возможным. Подробнее о повторном заражении читайте в статье «Лечится ли сифилис раз и навсегда» .

Применяются нетрепонемные тесты,так трепонемные тесты остаются положительными продолжительное время после лечения,а иногда всю жизнь.

При изучении антителообразования в организме больных сифилисом установлено, что первыми после заражения вырабатываются специфические IgM, выявляемые уже на 2-й нед после заражения и достигающие максимальной концентрации в крови на 6-9 нед. Через 6 мес после окончания терапии у большинства больных в крови они не определяются, На 4-й нед после инфицирования организм начинает продуцировать в достаточной степени специфические IgG. Этот вид иммуноглобулинов в наибольшем количестве определяется через 1 -2 года после заражения. Заслуживает особого внимания то, что специфические IgM перестают вырабатываться при исчезновении из организма антигена, а секреция IgG продолжается клонами клеток памяти. Кроме того, крупные молекулы IgM не проходят через плаценту от матери к плоду, в связи с чем по их наличию у ребенка судят об его инфицировании бледной трепонемой.

Подготовка к исследованию

Многообразие имеющихся на сегодняшний день в распоряжении врачей способов диагностики хламидиоза. с одной стороны, является положительным моментом, так как позволяет выявить заболевание максимально точно и быстро. Однако есть и обратная сторона: то, что проводятся исследования в разных лабораториях, на разных тест-системах и с применением разных реактивов привело к отсутствию единых норм. Проще говоря, заочно ответить на вопрос, являются ли полученные в результате обследования на хламидиоз титры нормой, одних только показателей этих самых титров недостаточно. В идеале, следует знать, какой именно анализ проводился, какие антитела выявлялись и даже в какой лаборатории проводилось обследование.

Тест для выявления IgG (Captia Syphilis G test) — тест-ловушка использует в качестве антигена очищенные патогенные трепонемы. У больных с вторичным, ранним и поздним сифилисом и нейроси-филисом и у реинфицированных пациентов чувствительность теста 100%. Тот же принцип ловушки для антител применен с целью определения сывороточных IgM (Дмитриев Г.А. Брагина Е.Е.).

Более никаких анализов проводить нет смысла. Ведущим обследованием для выявления наличия сифилиса является ИФА.

нетрепонемные тесты дешевле, менее точны (часто дают ложноположительные результаты) и используются для скрининга населения;

его затруднительно.Поэтому для диагностики сифилиса применяют так называемое серологическую диагностику,основанную на определении различных видов и классов антител,которые организм выработал с целью своей защиты от сифилитической инфекции т.е определяется не возбудитель инфекции,а как организм прореагировал на его появление.

Лица,поступившие на стационарное лечение (обязательная вассерманизация — в России,странах СНГ и некоторых других странах)

Принципы и методы лечения. Препараты для лечения больных сифилисом называются противосифилитическими средствами. Их назначают после установления диагноза с обязательным подтверждением его лабораторными данными. Рекомендуется начинать лечение возможно в более ранние сроки (при ранних активных фирмах сифилиса — в первые 24 ч), поскольку чем раньше начато лечение, тем благоприятнее прогноз и эффективнее его результаты.

Спинномозговую жидкость получают при люмбальной пункции. Место прокола соответствует точке пересечения двух линий: вертикальной (идет вдоль остистых отростков) и горизонтальной (линия Якоби). Горизонтальная линия должна соединять гребни подвздошных костей и проходить между остистыми отростками позвонков.

В третичном периоде заболевания постепенно исчезают антитела I gM и остаются I gG — в этот период сифилис может остаться серопозитивными только по трепонемным тестам (тестам, в которых для получения результатов используется материал бледной трепонемы).

РПГА — реакция пассивной гемагглютинации;

РИФ — реакция иммунофлуоресценции;

При вторичном рецидивном сифилисе положительный результат по стандартным серологическим реакциям отмечается в 96-98% наблюдений. Отрицательные результаты могут иногда объясняться малосимптомным рецидивным течением, наличием астенизации и сочетанием сифилиса и ВИЧ-инфекции. РИБТ дает положительный результат у 85-90% больных при выраженной степени иммобилизации — 80-90-100%.

ИФА — имунноферментный анализ;

Тест на сифилис tpha (реакцию пассивной гемагглютинации) предложил проводить T.Rathlev в 1965 году. Суть метода заключалась в реакции склеивания и выпадения в осадок эритроцитов, поверхность которых при сифилисе содержит антигены к бледной трепонеме, что наблюдается только, если в крови есть антитрепонемные антитела.

Cерологические тесты бывают трепонемными и нетрепонемными. Отличие в методе: нетрепонемные тесты проводят не с самой трепонемой, а с ее аналогом. Они дешевле трепонемных и могут определять количество антител в крови, а не просто их наличие. Зато трепонемные тесты точнее.

Для диагностики сифилиса применяются комбинация нетрепонемных и трепонемных тестов на сифилис или только трепонемные (подтверждающие) реакции.Серологическое обследование на сифилис назначается в следущих случаях:

Женщины, при подготовке к беременности

В лабораторных условиях к антигенам добавляется сыворотка крови обследуемого.Если в сыворотке (плазме) крови присутствуют антитела происходит реакция антиген-антитело и ее результаты обнаруживаются различными методами (положительный результат) при отсутствии антител реакция не происходит (отрицательный результат).Серологическую диагностику сифилиса осуществляют в следующих случаях.

Пожалуй, одним из самых ненадежных показателей является при обследовании на хламидии титр 1 5. Такие результаты разные врачи называют по-разному: кто-то утверждает, что утверждать о наличии инфекции, основываясь на таких результатах, нельзя и считает анализ отрицательным. В противовес такому мнению, существует практика называть результаты 1 5 слабоположительными. т.е. такими, которые нет острой необходимости лечить, но и оставить без внимания нельзя.

Хламидия менее 10 3

17 февраля 2009 г лежала в больнице с воспалением яичников-сифилис не обнаружен.В сентябре 2010 сдавала,тоже отрицательный.Где же он тогда взялся?В КВД сказали примерно он у меня 4 года.

К трепонемным тестам, наиболее часто применяемым в России, относятся:

5. Больные гонореей с невыявленными источниками заражения в случае невозможности установить за ними диспансерное наблюдение (лица без определенного места жительства, работы и ведущие аморальный образ жизни и т. д.), подлежат превентивному противо-сифилитическому лечению в условиях стационара. В тех случаях, когда госпитализация этих больных не представляется возможной, превентивное лечение проводится амбулаторно одним из дюрантных препаратов пенициллина.

Несмотря на значительное количество тестов для серодиагностики сифилиса, их высокую чувствительность и специфичность имеется ряд состояний при которых данные серодиагностики требуют проверки и дополнительных исследований. Например, у пациентов, полноценно леченных по поводу сифилиса, иногда длительное время остаются положительными серореакции. Это объясняется состоянием серорезистентности, которое до настоящего времени не получило научной трактовки. Затрудняется также дифференциальная диагностика неведомого сифилиса от рецидива процесса и реинфекции. С целью разработки более информативных вариантов серореакции были использованы детали антителообразования у больных сифилисом, с предложением и исследованием следующих вариантов серореакции: метод иммуноферментного анализа (ИФА), метод иммуноблоттинга (IgM-серология), полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Лицам с любыми генитальными язвами

Иммуноферментный анализ.

I gM (иммуноглобулины класса М) — это ранние антитела, которые отвечают за общий иммунитет (универсальную защитную систему организма). Эти антитела являются крупными и слабоспецифичными — эдакий «недоработанный материал». Спеша защититься от вторжения, организм не тратит время на изготовку белков, которые были бы предназначены исключительно для борьбы с трепонемой — он просто «бросает в бой» первое, что успевает сделать.

Если же изначально обследование показало титры, существенно превышающие показатель хламидиоза 1 20, то такие показатели, при одновременно проводимом лечении, будут свидетельствовать о том, что лечение подобрано правильно и оказывает необходимый эффект. Для того, чтобы «заочно» рассказать о значении этих показателей анализов, следует знать не только класс антител, но и полную историю болезни пациента, поэтому лучше всего обращаться за интерпретацией результатов к своему врачу.

Ответ: никак. Но их и не нужно убирать. Положительные трепонемные тесты не являются признаком болезни, если нетрепонемные — отрицательны, а человеку было проведено раннее лечение.

Серологическая диагностика сифилиса — суть метода

1. Сифилиса нет;

Передача сифилиса потомству наиболее вероятна в первые три года заболевания. В результате возникают поздние выкидыши (на 12 — 16 неделе), мертворождение, ранний и поздний врожденный сифилис. Поражение плода наиболее вероятно на 5-м месяце беременности и в родах. Проявления раннего врожденного сифилиса возникают сразу после рождения и аналогичны проявлениям вторичного сифилиса. Сифилиды позднего врожденного сифилиса возникают в возрасте 5-17 лет и аналогичны проявлениям третичного сифилиса. К безусловным признакам относится триада Гетчинсона (гетчинсоновские зубы, паренхиматозный кератит, лабиринтная глухота).

При ранних формах нейросифилиса более выражены количественные отклонения цитоза, концентрации белка, сочетающиеся с минимальной патологией коллоидной реакции. Тяжелые паренхиматозные сифилитические поражения головного и спинного мозга сопровождаются выраженными изменениями коллоидных реакций до пяти или шести «шестерок» в реакции Ланге. Реакция Вассермана в спинномозговой жидкости иногда может быть ложноотрицательной или ложноположительный. Положительные неспецифические данные реакции Вассермана в спинномозговой жидкости могут наблюдаться при опухолях мозга, эхинококкозе, цистицеркозе, рассеянном склерозе и паркинсонизме.

В результате заболевание растягивается на долгие годы.

МедКоллегия www.tiensmed.ru отвечает:

Во вторичном периоде становятся положительными все серологические тесты. На этой стадии в крови присутствует наибольшее количество антител сифилиса, поэтому тесты редко ошибаются в сторону ложноотрицательных результатов.

После проведенного лечения трепонемные тесты могут оставаться положительными, но нетрепонемные должны стать отрицательными. Показателем того, что лечение проводится эффективно, является снижение титра антител по результатам нетрепонемных тестов — не менее чем в 4 раза за 4 месяца. За год-полтора после начала лечения эти тесты должны стать полностью отрицательными.

При позднем врожденном сифилисе даже при наличии активных проявлений стандартные серореакции констатируются лишь у 70-80% обследованных, но зато РИБТ четко положительная у 100% больных с высоким титром иммобилизинов.

TPHA-реакция становится позитивной в среднем после 4 недель инфекции. Титры TPHA обычно низкие при первичном сифилисе (1:80-1:320), заметно растут во вторичной стадии, достигая 1:5120 и выше. Титры снижаются во время латентной стадии, но остаются позитивными, чаще с низкими значениями (1:80-1:1280). Титры TPHA могут снижаться после терапии, однако, результаты теста TPHA у людей, перенесших сифилис, почти всегда остаются положительными. TPHA — наиболее чувствительный и специфический метод обнаружения антител к Treponema pallidum. Небольшое количество ложноотрицательных результатов обычно связано с ранней первичной инфекцией, и это является единственной причиной, по которой тест TPHA не используется в качестве одиночного скринингового теста. Адекватным дополнительным тестом является антикардиолипиновый тест RPR (Rapid Plasma Reagin). Эти два теста являются взаимодополняющими, и комбинированное использование RPR и TPHA представляет лучший вариант скринингового исследования для обнаружения или исключения сифилиса на всех стадиях.

Эти защитные реакции организма ученые научились использовать для диагностики сифилиса и других инфекционных болезней. Специалист берет кровь человека, в которой, возможно, имеются антитела, добавляет в нее взвесь микробов (или их антигенов) и наблюдает — произошла реакция или нет:

Обычно анализы на сифилис трна берут в утренние часы за короткий промежуток времени, что связано с требованием к проведению исследования, среди которых указана необходимость доставки образцов крови в лабораторию не позднее, чем через 2 часа после её сбора. При этом транспортироваться образцы должны при температуре до +8°С.

В первую очередь организм вырабатывает антитела I gA. Позже появляются I gM. а самыми последними организм производит I gG – они остаются в крови еще долго после выздоровления.

Нетрепонемные тесты реагируют на неспецифичные антитела в крови (преимущественно — I gM и часть I gG). Их проводят с аналогом трепонемного антигена, но не с самой трепонемой — каридиолипиновым антигеном. Это значительно снижает стоимость тестов, но повышает количество ложноотрицательных результатов. Такие тесты проводят, в основном, для скрининга населения.

Антитела к Тreponema Pallidum: I gM I gA I gG – что это такое

Это белки крови, которые определяют «серологический сифилис»: инфекцию в крови или ее следы после излечения. Каждый из этих белков имеет разное строение, назначение и несет в себе определенную информацию.

МР+, РИФ+, РПГА- первичное заражение сифилисом, но, возможно, МР и РИФ показали ложноположительные результаты. Требуется пересдача анализа.

Исследование спинномозговой жидкости.

Лицам,имеющих клинические признаки сифилиса

Сифилис — хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся мультисистемным поражением организма. Возбудитель сифилиса — Treponema pallidum — неустойчива в окружающей среде, но хорошо сохраняется во влажных биологических материалах (сперме, влагалищном секрете, слизи, гное и др.). Передается половым, парентеральным, бытовым, трансплацентарным путями. Увеличивают риск заражения другие инфекции, передающиеся половым путем: герпес, хламидиоз, папилломавирусная инфекция и др.), а также повреждение слизистой оболочки при анальных контактах. Бледная трепонема имеет несколько антигенов, обусловливающих выработку антител. Один из них аналогичен кардиолипину, что позволяет использовать последний для обнаружения иммунитета к бледной трепонеме.

В 2002 г. во время беременности RW положительно. Прошла курс лечения, но беременность прервала (побоялась). В 2005 забеременела RW снова положительно. В 20 недель прошла профлечение, родила здорового ребенка. Сейчас мы ожидаем второго ребенка. Анализ RW слабоположительный. Мне снова проходить профлечение или нет? И подскажите когда-нибудь у меня будут нормальные анализы?

Хламидиоз титр 1 10

Серопозитивные и серонегативные периоды сифилиса

Структурное изображение антител

• Больные,готовящиеся к оперативному хирургическому вмешательству
• если произошла, значит в крови уже имеются эти антитела и, соответственно, человек болен;

При первичном серонегативном периоде сифилиса бывают положительными РИФ и реакция Колмера как наиболее чувствительные серореакции. Однако это не является основанием для постановки таким больным диагноза первичного серопозитивного сифилиса. У ряда больных в этом периоде бывает изолированный положительный результат при постановке реакции Вассермана с трепонемны-ми или с кардиолипиновым антигенами. В конце 3-й или в течение 4-й недели после появления первичной сифиломы становятся положительными стандартные серологические реакции — с этого момента начинается первичный серопозитивный период сифилиса. На 1-2-й неделе первичного серопозитивного сифилиса отмечается увеличение степени позитивности серореакции (1+, 2+, 3+) и нарастание титра реагинов (1:5, 1:10, 1:20). РИФ и реакция Колмера уже у всех больных дают резко положительный результат, но РИБТ, как правило, отрицательная или процент иммобилизации очень низок. Диагноз первичного серопозитивного сифилиса ставится и тем больным, у которых осадочные реакции и реакция Вассермана с неспецифическими антигенами дали даже однократный слабоположительный результат. При дальнейшем течении первичного сифилиса все серологические реакции становятся резко положительными (4+); титр реагинов достигает 1:80, 1:160, РИФ продолжает быть резко положительной, но РИБТ у большинства больных еще остается отрицательной или может стать слабоположительной.

Иммуноблоттинг — наиболее высокоточный тест. Он определяет не только I gM и I gG. но и подклассы I gG для разных антигенов бледной трепонемы. Такой углубленный подход к диагностике сифилиса редко используется в клинической практике (для анализа материала конкретного человека) — чаще его применяют для научно-исследовательских целей.

I gA (иммуноглобулины класса А) — это ранние антитела, которые отвечают за местный иммунитет (защитную систему, которая реагирует на вторжение инфекции в конкретную область организма). Ранние антитела в большом количестве выделяются на слизистых оболочках ротовой полости, дыхательного тракта, кишечника, и в меньшем — в крови. Они появляются раньше других (в первые недели после заражения) и служат показателем активно текущего инфекционного процесса. Для диагностики сифилиса они применяются довольно редко, т.к. не являются специфичными (реагируют не только на бактерию трепонемы).

Серорезистентный сифилис

Сифилис tpha (трна)

Как уже упоминалось, какие-либо однозначные нормы при проведении анализа на выявление хламидий чаще всего отсутствуют. Кроме того, для более точной интерпретации результатов важно знать, с какими показателями пациент обратился за помощью впервые, а также болел ли он такой инфекцией ранее. Из всего сказанного исходит вывод, что получить информацию о том, что означают результаты обследования, лучше всего у врача, который вас наблюдает и который давал направление на анализы.

Результаты RW после излечения сифилиса еще длительное время могут оставаться положительными.

Инструкцией предусмотрены следующие схемы лечения противосифилитическими препаратами.

• Военнослужащие

Единицы измерения и референсные значения

• МР+, РИФ+, РПГА+ сифилис подтвержден. Возможно, курс лечения был пройден недавно.

Антитела к Тreponema Pallidum (антипаллидум антитела) — это антитела, вырабатываемые организмом для борьбы с бледной трепонемой. По-другому они называются иммуноглобулины и обозначаются как I gM. I gA или I gG .

2. Возможна бытовая или парентеральная передача.

Первые I gM вырабатываются спустя 2 недели после заражения, однако обычные скрининговые тесты начинают распознавать их не раньше пятой-шестой недели (т.е. спустя 1-2 недели после появления твердого шанкра).

Именно титр 1 20 является своего рода точкой отсчета, с которой начинаются сильноположительные результаты анализа на хламидии. При обнаружении таких показателей нужно немедленно начинать лечение, поскольку острую форму заболевания вылечить намного легче, чем устранить хроническую, которая, возможно, уже сровоцировала всевозможные нарушения в работе организма человека.

здравствуйте, подскажите как быть. мне 32 года, первая беременность 14 недель. в женской консультации сдавала анализы. RW не обнаружено. РПГА -резко полож(4+). заболевание пролечила 13 лет назад. Как мне быть? В данный момент ожидаю результаты с диспансера, доздала ИФА, РИФ, если ИФА будет обнаружено, а РИБТ не обнаружено, нужно ли лечение? или какие анализы доздать, чтобы подтвердить или опровергнуть заболевание. РПГА, ИФА остаются положительными на всю жизнь? Спасибо

• МР-, РИФ-, РПГА- сифилис не подтвержден или ранняя стадия развития заболевания до появления антител.

TPHA- тест на присутствие специфических антител против бледной трепонемы (микр оорганизма, вызывающего сифилис).

Иногда при положительном исследовании tpha показатели титров оказываются настолько незначительными, что диагноз сифилиса вызывает серьёзные сомнения. В таком случае ставится пометка о сомнительности полученных данных и рекомендуется повторная пересдача через 1-2 недели.

• Во вторичном периоде иммунный ответ (реакция защитной системы на болезнь) находится в разгаре, и все анализы становятся положительными — сифилис является серопозитивным.

TPHA-тест(Treponema pallidum hemagglutionation assay) Тест TPHA является специфическим диагностическим трепонемным тестом, выявляющим антитела к антигену Treponema pallidum. В соответствии с приказом Минздрава России, исследование крови в тесте TPHA в сочетании с тестом RPR заменяет постановку КСР (комплекса серологических реакций на сифилис). № TPHA — реакция пассивной гемагглютинации с антигенами бледной трепонемы

• Детям,родившимся от больных сифилисом матерей

I gG могут сохраняться в крови в течение нескольких лет, поэтому трепонемные тесты останутся положительными даже после излечения. Это часто смущает пациентов, и многие из них задаются вопросом: «Как убрать антитела к сифилису из крови?».

Надо отметить, что общеизвестное утверждение о том, что интерпретировать результат должен только лечащий врач, который анализы назначал и знает, кем и где они проводились, — часто игнорируется. Многие лаборатории выдают результаты на руки самому пациенту, но при этом далеко не каждые из них снабжены нормами, а сообщают только полученные в результате титры. В итоге человек начинает искать в различных источниках ответ, что означают указанные титры хламидий и являются ли они нормой. В таких поисках далеко не всегда он обращается к специалистам, поэтому избежать различных проблем (ненужного лечения, либо, наоборот, — отсутствия терапии при ее срочной необходимости) удается далеко не всегда.

4. Пробное лечение назначают лицам, у которых клиническая картина позволяет подозревать наличие поздних третичных сифилитических поражений кожи, суставов, костей, внутренних органов и нервной системы, а лабораторные, серологические исследования (КСР, РИФ, РИБТ) не могут подтвердить или отвергнуть такой диагноз.

Однако в диагностике сифилиса все не так однозначно, и диагноз никогда не ограничивается результатом только одного теста. Чтобы понять, отчего зависят результаты серологических тестов, и почему нельзя поставить диагноз только по одному из них, надо разобраться в том, что такое антитела, когда они появляются и какими бывают.

Если специфические антитела к Treponema pallidum в TPHA тесте не обнаружены, выдается результат «отрицательно». При очень низких титрах в комментарии дается пометка «сомнительно, рекомендуется повторить через 10-14 дней». Референсные значения: отрицательно.

Отрицательно:

lgM-серология.

Результаты серологических тестов в разные периоды

Совсем другая история, если помимо I gG. остаются положительными и I gM .

• Инфекционный мононуклеоз;

Особенности инфекции.

Предварительно всем больным до начала антибиотикотерапии назначают антигистаминные средства в таблетках.

Реакция микрогемагглютинации с бледными трепонемами (МНА-ТР) является вариантом ТРПГА. Ее ставят на пластинках для микротитрования. Она требует по сравнению с ТРПГА намного меньшего количества сыворотки, адсорбирующего разбавителя и антигена. Окончательный результат получают уже после 4 ч инкубирования сыворотки. Автоматизированная реакция микрогемагглютинации с бледными трепонемами (АМНА-ТР) благодаря автоматизации процессов заполнения тест-пластин и разведения сыворотки еще проще и обходится еще дешевле, чем реакция АМН-ТР. Она особенно пригодна при массовых обследованиях на сифилис.

При проведении иммуноблоттинга трепонемы подвергаются электрофорезу с разделением белковых иммунодерминант на нитроцеллюлозе. Затем производится обработка разделенных точек исследуемой сыворотки и антителами к IgG либо IgM, меченными ферментами или радиоактивными веществами.

Беременные женщины

Серология — это наука, изучающая сыворотку крови. Все серологические тесты основаны на иммунных реакциях в сыворотке крови: иммунные белки-защитники (антитела) соединяются с белками-микробов (антигенами) и происходит реакция, в результате которой антигены микробов нейтрализуются.

Для того, чтобы как можно точнее ответить пациенту, что означает титр хламидий 1 10, следует знать, к каким именно антителам он относится. Если речь идет о Ig A, то следует немедленно начинать лечение хламидиоза, поскольку как раз в данный момент заболевание находится в самом начале своего активного развития, а следовательно - болезнь еще не причинила человеку серьезного ущерба.

Диагноз скрытого серопозитивного сифилиса, как указывалось выше, устанавливают только по положительным серореакциям в крови с обязательным подтверждением их по РИБТ, так как только РИБТ (и в меньшей степени РИФ) позволяет отдифференцировать ложноположительные серореакции (даже с позитивностью в 2+ или 3+) от истинно положительных.

Отдельный вопрос — нейросифилис. Это редкое состояние, когда лечение вторичного и скрытого сифилиса препаратами пенициллина, которые не проходят через гематоэнцефалический барьер, не позволило полностью победить инфекцию. Чтобы исключить наличие нейросифилиса, проводится пункция костного мозга.

Противосифилитические средства.

Также применяются и рутинные методы исследования — общие анализы крови и мочи,биохимический анализ крови и.т.д.

Лечение сифилиса

Кроме того, хламидии 1 80 могут означать как наличие заболевания в острой форме (при первичном обращении пациента с жалобами на признаки. специфичные для данного заболевания), так и успешное избавление от него. Во втором случае речь идет о более высоких показателях, полученных ранее, а следовательно, титр хламидиоза 1 80, выявленный через установленный срок от начала лечения, — доказательство его правильности и эффективности.

Третичный сифилис характеризуется положительными результатами по стандартным серологическим реакциям в 50-90% наблюдений и положительной РИБТ у 92-100% пациентов с высоким процентом иммобилизации.

Пациенты, в результатах анализа которых указано наличие хламидий 1 40, безусловно, больны и нуждаются в лечении. Тем не менее, многое зависит от конкретной ситуации, в которой такие результаты были получены. Если антитела Ig A в таком титре обнаружены у новорожденного - скорее всего, он получил их от матери и останется носителем на всю жизнь. Когда титр хламидиоза 1 40 обнаруживается при первом обследовании человека, предположительно имевшего контакт с носителем - заражение произошло и требует немедленного медицинского вмешательства. В то же время, такой же титр может являться и нормой. Речь идет о тех случаях, когда показатели 1 40 обнаружены в результате контрольных исследований во время лечения данной инфекции. Так, если первоначальный титр был существенно выше, то полученные через оперделенное время сниженные показатели свидетельствуют о том, что лечение назначено правильно и пациент выздоравливает.

В вашей ситуации необходимо исключить серорезистентный сифилис — форму заболевания, при которой даже после прохождения полного курса антибиотиков тесты показывают положительный результат. Это говорит о том, что лечение не помогло и в организме живет измененная форма спирохеты, стимулирующая выработку антител, или лечение помогло, но из-за нарушений в работе иммунной системы антитела против возбудителя сифилиса все еще вырабатываются.

Инесса спрашивает:

• МР-, РИФ-, РПГА+ давняя инфекция, сифилис излечен. Возможно результат РПГА — ложноположительный.

Уважаемая Наталья!

Особое внимание уделяется исследованию спинномозговой жидкости (ликвора) для определения пораженности сифилисом нервной системы, как критерий качества лечения у лиц с патологическими изменениями в ликворе до начала лечения и как один из критериев излеченности больных.

За последние годы накоплен большой материал по организации и оптимизации современных методов лечения больных различными стадиями и формами сифилиса. Основной тенденцией в настоящее время является совершенствование методов лечения с целью укорочения продолжительности его по всем схемам. В основу разработанных методов положен принцип повышения разовых и курсовых доз антибиотиков при различных стадиях сифилиса в комплексе с неспецифической терапией, а также метод лечения свежего сифилиса рекомендуемый ВОЗ, с использованием импортного бензатин-пенициллина G и др.

Что такое серологическая диагностика сифилиса

В качестве антигенов используют фабрично изготовленные препараты,аналогичные по своей структуре антигенам липидов,появляющихся в организме при разрушении тканей бледной спирохетой,липидам ее мембран и специфическим молекулярным соединениям,входящих в состав мебраны бледной спирохеты (для этих целей используются очищенные и ультраозвученные штаммы трепонем или выделенные от них рекомбинантные антигены).

Все серологические тесты разделяют на трепонемные и нетрепонемые.

К нетрепонемным тестам, применяемым на данный момент в России, относятся:

Попробуйте повторить обследование в независимой лаборатории самостоятельно. Необходимо пройти обследование методом ИФА и РИФ. При беременности, в некоторых случаях, реакция Вассермана может быть положительной без заболевания сифилисом. В том случае, если анализы подтвердятся, Вам нужно будет проходить лечение, по схеме, назначенной Вашим врачом.

• Болезнь Лепре;

Метод заключается в многократном увеличении (амплификации) количества ДНК выявляемого микроорганизма. Разработка вариантов ПЦР для диагностики сифилиса обусловлена недостаточностью стандартных тестов при раннем серонегативном, врожденном сифилисе и нейросифилисе. ПЦР является превосходным методом для диагностики сифилиса при небольшом количестве трепонем в исследуемом материале. Большим достоинством ПЦР является возможность автоматизации реакции путем заданного циклического температурного режима для определяемой за счет меченных праймеров цветной реакции. Остается невыясненным вопрос — отражает ли наличие трепонемной ДНК присутствие жизнеспособных трепо-нем или это могут быть остатки погибших микроорганизмов, содержащие способную к амплификации ДНК.

ИФА может определять антитела к treponema pallidum суммарные, а также отдельно I gM. I gG и даже I gA .

Диагноз сифилиса должен быть подтвержден лабораторными исследованиями, однако, в некоторых случаях может быть обоснован, несмотря на отрицательные результаты серологических реакций. Особое значение лабораторная диагностика сифилиса имеет у следующих категорий обследуемых:

Метод иммуноблоттинга.

• В первичном периоде сифилиса, когда на коже появляется твердый шанкр, иммунитет только набирает свою силу, и в первые недели анализы крови на сифилис будут отрицательными. Этот период называют ранним серонегативным сифилисом. Когда же результаты анализов становятся положительными, ставится диагноз: ранний серопозитивный сифилис.

В этом случае встает вопрос о серорезистентности сифилиса. Такое состояние возникает, как правило, после неполноценно проведенного лечения. Это проявляется стойкими положительными результатами нетрепонемных тестов в течение года и более или замедленным и несущественным снижением титра антител — меньше, чем в 4 раза за 1,5 года. В этом случае обязательно проводится дополнительное лечение сифилиса.

С начала 60-х годов пенициллин и его дюрантные производные являются препаратами выбора при лечении больных сифилисом. Наибольшее распространение среди дюрантных пенициллинов получила N.N-дибензилэтилендиаминовая соль бензилпенициллина, которая производится во многих странах мира под различными названиями — бициллин-1, ретарпен, экстенциллин, тардоциллин, пентибен. Высокая терапевтическая эффективность, минимальные сроки лечения (1-2 нед), высокие экономические показатели ставят бензатин-бензилпенициллин на одно из ведущих мест среди известных препаратов для регулярного лечения больных сифилисом. Зарубежные исследователи, опираясь на данные фармакокинетики, отказались от применения многокомпонентных антибиотиков, остановив свой выбор на бензатин-бензилпенициллине, однократная инъекция которого в дозе 2,4 млн ЕД обеспечивает трепонемоцид-ную концентрацию антибиотика в крови в течение 21-23 сут.

Хламидии 1 80

Что происходит с антителами к сифилису после излечения

Появление третичных сифилидов (бугорков и гумм) знаменует начало третичного периода, который наступает у 40% нелеченных и неполноценно леченных больных. Волны третичного периода разделены более продолжительными (иногда многолетними) периодами латентного течения инфекции. В пораженных органах и тканях возникают деструктивные изменения. В третичных сифилидах содержится крайне мало трепонем, поэтому они практически не заразны. Напряженность иммунитета падает (т.к. уменьшается количество бледных трепонем), поэтому становится возможным новое инфицирование (ресуперинфекция).

2. Подготовка к беременности;

• I gA — ранний сифилис, заражение произошло недавно (менее двух недель);

Эти антитела «атакуют» микробы и, если не уничтожают болезнь, то хотя бы замедляют ее развитие.

Разные формы сифилиса нервной системы и висцерального сифилиса имеют различную частоту и выразительность стандартных серореакции. Так, прогрессивный паралич в 100% случаев сопровождается резко положительными всеми стандартными серологическими реакциями. Сифилис сосудов мозга, спинная сухотка, сифилитическое поражение сердечно-сосудистой системы сопровождаются положительными серореакциями лишь в 40-50-60% наблюдений. Однако РИБТ почти при всех перечисленных патологических состояниях дает резко положительный результат (90-100% иммобилизации).

Здравствуйте я получила анализы, ИФА -анти люис не обнаружено, РВ не обнаружено, РПГА (4+) врач венеролог рекомендует всё-таки пролечится, на 15 неделе 20 дней пенициллин 6 раз в день, а потом на 20 неделе проф.лечение 10 дней. Ваше мнение, как мне быть лечь и пролечится или попробовать проконсультироваться ещё с врачом(другим) И, что, Вы думаете. Спасибо

Виды тестов на сифилис

1. Специфическое лечение больных сифилисом с установленным и подтвержденным диагнозом.

• После выздоровления в организме могут некоторое время оставаться I gM и I gG. Длительное сохранение I gG считается нормой и не требует лечения, а вот длительное сохранение I gM является патологией (ненормальным состоянием) и обозначается, как «серорезистентный сифилис».

Для того, чтобы избежать любых негативных последствий, лучше все же не забывать о том, что хламидиоз провоцирует достаточно серьезные проблемы со здоровьем, а потому даже такие результаты, как 1 5 лучше всего лишний раз перепроверить. В идеале, такие микроорганизмы не должны присутствовать у человека, однако данные показатели анализов могут быть спровоцированы наличием других половых инфекций, пролеченных ранее.

После излечения убрать антитела к сифилису из крови невозможно. Со временем они исчезнут сами. А до этого времени пациенту нужно иметь на руках выписку о том, что лечение состоялось и было успешным.

• В первичном периоде . с 7-10 день твердого шанкра, становятся положительными нетрепонемные тесты, а с 3-4 недели — трепонемные.

  Поскольку хламидиоз относится к тому типу заболеваний, которые часто протекают скрыто и не проявляются специфическими симптомами, его обнаружение на поздних стадиях - явление отнюдь не редкое. Так, обнаруженный титр 1 160 - это свидетельство того, что болезнь уже достаточно давно протекает в хронической фазе и на данный момент, помимо того, что пациента требуется лечить от хламидиоза, потребуется еще целый ряд мероприятий, направленных на устранение последствий данного заболевания. Обнаруженный титр хламидий 1 160 также является причиной для того, чтобы обследовать полового партнера (или партнеров), с которыми у больного была связь в последнее время. Игнорировать такие показатели нельзя ни в коем случае, так как запущенная инфекция такого плана приводит к многочисленным расстройствам мочеполовой сферы, в том числе и к бесплодию.

  Хламидиоз титр 1 5

• Иммуноблоттинг.

Применение ПЦР может иметь большое значение при диагностике врожденного сифилиса (пассивный трансплацентарный перенос антител не влияет на результаты теста), нейросифилиса, первичного серонегативного сифилиса (в настоящее время единственным критерием является прямое микроскопическое обнаружение трепонем), а также у больных, у которых диагностика сифилиса с помощью обычных серологических реакций затруднена из-за ин-фицирования ВИЧ (Дмитриев Г.А. Брагина Е.Е.).

Показатель антител к хламидиям 1 80 интерпретируется в зависимости от того, какой именно класс антигенов выявлен в результате анализов. Если такой титр показали Ig G при отрицательном Ig A, пациенту не о чем беспокоиться, так как это доказательство того, что заболевание было перенесено и в крови остались антитела к нему. При подозрении на ложноотрицательные результат Ig A (например, при подтвержденном хламидиозе у полового партнера) может быть назначено дополнительное обследование, чаще всего - методом ПЦР. результаты которого четко дадут понять, инфекция у человека либо же иммунитет к ней.

В пробирку собирают 7-8 мл (но не более 10 мл) спинномозговой жидкости. Это количество распределяют в две пробирки, одну из которых направляют в клиническую лабораторию, а другую — в серологическую лабораторию.

Впервые I gG появляются через 4-5 недель после заражения, и по мере увеличения их титра (концентрации в крови), они становятся видны в обычных анализах — через 7-8 недель после заражения (т.е. через 3-4 недели после появления твердого шанкра).

При классическом течении инкубационный период длится 3-4 недели, первичный серонегативный — 1 месяц, затем первичный серопозитивный — 1 месяц, затем вторичный период — 2-4 года, далее третичный период. В первичном периоде возникает твёрдый шанкр (безболезненная язва или эрозия с плотным дном в месте проникновения бледной трепонемы), сопровождающийся регионарным лимфангиитом и лимфаденитом. В конце первичного периода шанкр самостоятельно заживает, а лимфаденит переходит в полиаденит и сохраняется до пяти месяцев.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Может ли повлиять мой отрицательный резус фактор на анализы? (у мужа положительный. Возможно у меня резус конфликт с плодом(, так как до этой беременности были 2аборта). И куда можно обратится,что бы разобраться в этой ситуации?И как это лечение повлияет на плод.

Ложноположительные результаты нетрепонемных тестов

Первое генерализованное высыпание является признаком начала вторичного периода. Вторичные сифилиды появляются волнообразно (на 1,5-2 месяца каждая волна) и самостоятельно исчезают. Могут быть представлены пятнистыми, папулезными, пустулезными сифилидами, сифилитической аллопецией (облысением) и сифилитической лейкодермой («ожерелье Венеры»). На втором полугодии вторичного сифилиса исчезает полиаденит.

Подготовка к исследованию: Не требуется.

• I gG — поздний сифилис (более 2-4 лет) или успешно пролеченный сифилис.

Контроль за лечением сифилиса

• Лицам с подтвержденным диагнозом других половых инфекций

Серьезное преимущество нетрепонемных тестов над трепонемными — это возможность проводить количественную оценку антител в организме (определение титра) и, соответственно, контролировать эффективность лечения.

Диагностика сифилиса

Метод иммуноферментного анализа (ИФА, The enzymelinked immunosorbent Assay, Elisa) широко используется для диагностики сифилиса. Принцип реакции заключается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с антителом испытуемой сыворотки крови и выявления специфического комплекса антиген — антитело с помощью антивидовой иммунной сыворотки, меченной ферментом. Взаимодействие фермента с субстратом дает цветную реакцию, интенсивность которой зависит от количества связанных сывороточных антител.

• Лицам — половым партнерам больных сифилисом,а также в случае близкого бытового контакта с больным вторичным сифилисом

По симптомам сифилис разделяется на первичный, вторичный и третичный. По анализам же серологических реакций — на серопозитивный и серонегативный.

2. Ранний первичный сифилис.

Поэтому такие тесты дают большую точность по сравнению с нетрепонемными, но стоят значительно дороже. Из-за этого трепонемные тесты проводятся, в основном, для подтверждения результатов нетрепонемных.

• Некоторые профессиональные контингенты (работники питания,образования,здравоохранения)

Важно понимать, что опираться на результаты только одного анализа нельзя, так как каждый из них может давать разные результаты на разных стадиях болезни.

В большинстве случаев обнаружить возбудителя сифилиса невозможно или обнаружение

Эти временные границы являются неточными, и анализы могут стать положительными позже (особенно, если в период после заражения человек принимал антибиотики). Поэтому в случае подозрения на сифилис серологические тесты рекомендуется повторить через 10-14 дней или сразу провести один из прямых методов диагностики (ТПМ или ПЦР).

Вопрос: сифилис и его лечение при беременности?

Здравствуйте! Мне 27 лет, и у меня беременность 38 недель. Анализ в женской консультации показал RW++++, была направлена в КВД для уточнения анализа. Там сдавала анализы, результаты врач мне не показывал, только сообщил, что все положительны(сифилис поздний скрытый неуточненный) и направил на до обследование в инфекционную больницу.Здесь взяли тоже анализы и не дожидаться результатов начали колоть бензилпенициллин 1000000ЕД на новокаиновом растворе 0,5%. Курс лечения назначили по 4 укола в сутки 20 дней.потом две недели перерыв и снова две недели проф-лечение,кроме этого сказали еще 14 дней будут колоть ребенка пенициллином.

Такая ситуация, как у вас, встречается часто. Для того чтобы понять, есть ли необходимость в повторном лечении заболевания, давайте разберемся, какой именно анализ вы сдавали и какие варианты развития ситуации имеются на данный момент.

Для успешного снижения заболеваемости сифилисом установлена необходимость комплекса мероприятий. Своевременная диагностика с выявлением источников и контактов сочетается с активным назначением современного лечения в соответствии с особенностями организма больного и своеобразием симптоматики процесса. Проводимая многими научно-исследовательскими институтами, кафедрами кожных и венерических болезней медицинских институтов работа, направленная на совершенствование методов лечения сифилиса неоднократно обсуждалась на съездах и международных симпозиумах дерматовенерологов. При этом вырабатывались рекомендации и инструкции по применению теоретически обоснованных и практически проверенных многолетними клиническими наблюдениями методов и схем, обеспечивающих полноценный терапевтический эффект.

В клинической лаборатории исследуют цитоз, содержание белка, глобулиновые реакции Панди и Нонне-Апельта. Минимальные патологические изменения в спинномозговой жидкости следующие: содержание белка, начиная с 0,4%, цитоз — 8 клеток в 1 мкл, глобулиновые реакции (реакция Нонне — Апельта++, реакция Пан-ди+++; реакция Ланге — больше двух двоек в цифровом значении, положительная реакция Вассермана). Показатели выше указанных, даже будучи изолированными, свидетельствуют о выраженных патологических изменениях в спинномозговой жидкости. Патологической считается также такая спинномозговая жидкость в которой несколько показателей изменены соответственно данным минимальной патологии, а реакция Вассермана положительна. Концентрация белка в спинномозговой жидкости свыше 400 мг/л и число клеток в ней более 5000 на 1 л свидетельствуют о воспалительном процессе в ЦНС. Для обозначения позитивности глобулиновых реакций и РВ применяется система четырех плюсов; резко положительный результат (4+), положительный — 3+, слабоположительный — 2+ и сомнительный — 1+.

Современные усовершенствованные серореакции с использованием принципов иммуноферментных констант.

• Доноры крови и органов для трансплантации

Эти белки вырабатываются на протяжении первичного и вторичного периодов сифилиса, на третичном же периоде они постепенно исчезают. I gM говорят о том, что болезнь находится в активной стадии, и исчезают после проведенного лечения. Однако у некоторых людей они могут сохраняться и до 1-1,5 лет после излечения.

При врожденном сифилисе детей грудного возраста с активными проявлениями стандартные серореакции могут быть отрицательными в 1% наблюдений.

• если нет — то и антител в наличии нет, и человек считается здоровым.

Массовое обследование определенных групп населения.Для скрининга применяются дешевые,простые и быстрые по исполнению тест системы,основанные на нетрепонемных тестах.Скринингу на сифилис подвергаются:

• Для подтверждения результатов скрининга (отборочных реакций)

2. Превентивное лечение лиц, находившихся в тесном бытовом или половом контакте с больными сифилисом. Эта схема имеет значение, если с момента контакта пришло не более 2 мес. По истечении этого срока превентивное лечение не достигает цели; оно не назначается, а данное лицо подвергается клинико-серологическому ежемесячному контролю в течение 6 мес.

Сифилис трна является специфическим тестом, направленным на выявление IgG антигена. Обычно к данному исследованию прибегают после получения положительного результата при RРR или для оценки эффективности выбранного лечения. Сифилис трна является высокочувствительным анализом, который может показывать положительный результат ещё до 20 лет после успешной терапии, а в отдельных случаях остаточные следы болезни могут сохраняться на всю оставшуюся жизнь.

Хламидиоз титр 1 160

• МР+, РИФ-, РПГА- заражение сифилисом отсутствует. МР дал ложноположительный результат.

Титры хламидий 10 3, 1 5, 1 10, 1 20, 1 40, 1 80,1 160 — какова норма хламидиоза?

• I gA и I gM — ранний сифилис, заражение произошло недавно (менее четырех недель);

Если диагноз «серорезистентный сифилис» подтвержден, то первым делом необходимо выяснить, есть ли следы бледной трепонемы в организме. Это можно сделать с помощью дополнительных тестов (ПЦР или ИФА). При обнаружении таких следов будет назначен дополнительный курс лечения антибиотиками. В случае если серорезистентность вызвана нарушенной работой иммунной системы, лечение не требуется, т.к. это означает, что сифилис на самом деле излечен.

• МР-, РИФ+, РПГА- сифилис на ранней стадии или РИФ дал ложноположительный результат.

Клиническая оценка результатов серологических реакций.

Метод определения: реакция непрямой гемагглютинации. Реагент содержат птичьи эритроциты, покрытые молекулами антигена Treponema.pallidum. В присутствии сифилитических антител сенсибилизированные эритроциты агглютинируют, образуя характерную форму в реакционной смеси.

При врожденном сифилисе раннего детского возраста отрицательные стандартные серореакции варьируют от 15 до 20%, но в этих случаях РИБТ дает положительные данные у 90-98% детей.

1. Лабораторное подтверждение сифилиса;

Проведение комплексной терапии в первые 4 месяца беременности позволяет избежать инфицирования плода.

Здравствуйте! Мне 24 года, и у меня беременность 15 недель. Анализ в женской консультации показал RW++++, была направлена в КВД для уточнения анализа. Там три раза сдавала различные анализы (РИФ, РПГА, РПР), результаты анализов врач мне не показывал, только сообщил, что все положительны. Визуальных признаков заболевания у меня нет. Муж так же прошел обследование на данное заболевание включая 7 различных видов анализов. У него все отрицательно.(вместе мы 2 года и я ему не изменяла).Прошла курс лечения цефтриаксоном 10 дней. При повторной сдаче анализов после лечения врач сказала, что ситуация у меня почти не изменилась. Может ли повлиять мой отрицательный резус фактор на анализы? (у мужа положительный. Возможно у меня резус конфликт с плодом, так как до этой беременности были 2 замершие). не рано ли назначено лечение при сроке 13 недель? На каком сроке лучше и безопасней пройти лечение цефтриаксоном?

Диагностика сифилиса — это очень сложный процесс, а серологические тесты (тесты по сыворотке крови) — его основа. Без них диагностики сифилиса не было бы на том уровне, на котором она есть сейчас: скрининги (массовые обследования населения), контроль эффективности лечения, диагностика сифилиса в скрытом и позднем периодах — все это заслуга серологических тестов.

Что же касается титра 1 10 в отношении антител Ig g, то интерпретировать их, как отрицательный результат, можно при обнаруженных Ig A - 0. В этом случае полученные результаты свидетельствуют о том, что заболевание было перенесено ранее, на данный момент пациенту ничего не угрожает, в лечении он не нуждается и опасности для его половых партнеров нет.

Показания к назначению анализа

Как ставится диагноз сифилиса

На 6-й неделе беременности сдала анализ на РВ. Показало, как сказал врач, не очень хорошие результаты. 14 лет назад лечилась, с учета снята 13 лет назад. При первой беременности, 11 лет назад, тоже был положительный результат. Тогда в КВД провели обследование, в справке было указано — не нуждается в профлечении. Сказали, что при беременности теперь всегда будет +. Родила здорового ребенка. В муже уверена, в себе — тем более. Никаких симптомов не было. Надо ли сдавать допполнительные анализ?

Дело в том, что для постановления диагноза «сифилис» приоритетными являются результаты RW, для уточнения диагноза, Вы можете дополнительно сдать анализ на РИБТ (реакции иммобилизации бледной трепонемы).

Трна анализ рекомендовано проводить через месяц после предполагаемой даты инфицирования. Пред самим сбором следует воздержаться от приёма пищи, по меньшей мере, на протяжении 8 часов. Если результаты проведённого трна теста указывают на отсутствие инфекции, но у больного имеются симптомы ранние симптомы заражения или в прошлом был половой акт с человеком, у которого обнаружили заражение спирохетами, то рекомендуют провести ещё одно контрольное исследование с интервалом в 2 недели. В отличие от ложноотрицательного результата tpha, при использовании данного метода выявления антигена IgG, причиной которого может стать слишком ранний срок проведённого исследования, ложноположительный результат на бледную трепонему может наблюдаться в трёх случаях:

Так происходит и с сифилисом: когда бледная трепонема попадает внутрь организма, для борьбы с ней вырабатываются антитела, которые не дают болезни молниеносно захватить организм.

Трепонемные тесты проводятся со специфичными антигенами и реагируют на специфичные антитела (то есть именно на саму бледную трепонему). Преимущественно это I gG и частично — I gM. однако наиболее точные из трепонемных тестов «видят» оба вида белков — и I gG. и I gM .

Copyright © 2001 INVITRO

Отрицательный результат

Серологическое исследование (от от лат. serum — сыворотка) представляет собой лабораторный анализ плазмы каппилярной или венозной крови основаный на иммунологической реакции антиген-антитело.

Положительный результат

Необходима консультация врача венеролога, а так же можно сдать анализ крови на наличие трепонем (РИФ, РИБТ, RW c трепонемным антигеном).

Трепонемные vs нетрепонемные серологические тесты

Трепонемные тесты у человека, перенесшего сифилиса, будут положительными всю жизнь. Антитела к инфекции сохраняются в крови на долгие годы. Это так называемая напряженность иммунитета. При исследовании крови ИФА при пролеченном сифилисе положительными будут титры IgG, а IgM будут отрицательными. При таких результатах анализов повторное лечение не требуется.

Титр 1 40 хламидии

Хламидии титр 1 20

TPHA-тест(Treponema pallidum hemagglutionation assay) Тест TPHA является специфическим диагностическим трепонемным тестом, выявляющим антитела к антигену Treponema pallidum. В соответствии с приказом Минздрава России, исследование крови в тесте TPHA в сочетании с тестом RPR заменяет постановку КСР (комплекса серологических реакций на сифилис). TPHA исследование может использоваться как диагностический подтверждающий тест на сифилис, а также как высокоэффективный отборочный (скрининговый) тест.

Лабораторная диагностика сифилиса

1. Сифилис в разных клинических стадиях, включая адекватно пролеченный сифилис.

Положительно:

• В третичном периоде остаются положительными трепонемные тесты, и постепенно становятся отрицательными нетрепонемные, т.к. исчезают из крови антитела I gM .
• Лица,отбывающие наказание в местах лишения свободы

Нетрепонемные тесты определяют антитела класса IgG и IgM к липидам(фосфолипидам),

Если терапия была подобрана правильно, и лечение оказалось эффективным, то антитела к сифилису в крови начнут стремительно уменьшаться: за 4 месяца титр антител (I gM) должен снизиться в 4 и более раз. В целом I gM в крови должны исчезнуть не более чем за 6-12 месяцев. Т.е. все нетрепонемные скрининговые тесты должны стать отрицательными.

В качестве исследуемого материала для tpha используется сыворотка крови, сданная человеком натощак. Если соблюдены все необходимые условия при проведении забора крови и последующего анализа, то точность полученных данных будет составлять 76% — при первичной сифиломе, 100% — при вторичной форме заболевания и 94 — на поздней стадии развития болезни. Обнаружение бледных трепонем в периоды бессимптомного протекания заболевания составляет около 97%. А уровень специфичности, достигающий до 99%, позволяет почти полностью исключить варианты ложноположительных результатов, облегчая дифференциальную диагностику больных.

Показания к назначению анализа:

Результаты постановки теста TPHA в случае положительного результата выражаются полуколичественно — в титрах (т.е. указывается максимальное разведение сыворотки, при котором обнаруживается положительная реакция).

• I gA. IgМ и I gG — ранний сифилис, заражение произошло более четырех недель назад;

Если изначально неизвестно, болен ли человек сифилисом, врачи проводят скрининговые нетрепонемные тесты — RPR, РВ, РМП и другие. Эти тесты очень чувствительны и легко показывают скрытую инфекцию. Однако их результаты часто бывают ложноположительными, и для их подтверждения дополнительно проводят один из трепонемных тестов (чаще РПГА или ИФА).

Подводя итоги, можно сделать выводы, что:

Заражение от больного человека возможно в любом периоде сифилиса. Наиболее инфекционными являются первичный и вторичный сифилис при наличии активных проявлений на коже и слизистых оболочках. Бледная трепонема проникает через микроповреждения кожи или слизистых в лимфатические сосуды, затем в лимфатические узлы. Далее возбудитель распространяется по органам и может определяться во всех биологических средах (слюне, грудном молоке, сперме и т.д.).

Время исчезновения бледной трепонемы с поверхности шанкров и эрозивных папул при введении экстенциллина составило от 2 до 10 ч, ретарпена — от 4 до 10 час (в среднем — 7 ч), а бициллина-1 — от 7 до 10 ч (в среднем 5 ч).

Ввиду того, что концентрация в крови специфических IgM закономерно снижается после эффективного лечения, рост титра этих антител может служить вспомогательным признаком наличия рецидива заболевания или реинфекции (В.Н.Беднова). В 1997 г. предложена реакция 19S IcM-FTA-ABS, а затем 19S IgM-TPHA. В основе этих тестов лежит разделение с помощью гельфильтрации испытуемых сывороток на 19S IgM и 7IgG и выявление первых с помощью иммунофлюоресцентного метода и теста гемагглютгинации. Затем была предложена реакция гемадсорбции на твердофазном носителе IgM-SPHA, объединяющая элементы постановки ИФА и РПГА, а также 19SIM-SPHAH IgM-TP-ABS-ELISA. IgM-SPHA-тест наиболее пригоден для характеристики сифилитического процесса и в ЦНС в частности, а также отличия рецидива заболевания от реинфекции.

Материал для исследования: сыворотка.

1. Возможно латентное течение или обезглавленный сифилис (сифилис без твердого шанкра, трансфузионный сифилис, когда трепонема попадает непостредственно в кровь при переливании крови, порезе);

• МР-, РИФ+, РПГА+ давняя инфекция, сифилис излечен. Возможен поздний сифилис.

Особенности инфекции

• трепонемные тесты — дороже, дают более точный результат и используются для подтверждения результата скрининговых тестов.

На сегодняшний день, tpha исследование применяется как наиболее эффективный специфический серологический тест для подтверждения полученного положительного результата других анализов на сифилис или при необходимости оценить эффективность лечения.

• болезнь Вельяминова; Лечение женщин с фиброзно-кистозной мастопатией должно быть сугубо индивидуальным. Прежде чем приступать к лечению, женщина должна быть тщательно обследована и проконсультирована у всех смежных специалистов (эндокринолога. гинеколога. психотерапевта). начало первой менструации ранее […]
• снимают воспаление; Некоторые травы имеют в своем составе природный антибиотик. Он накапливается в моче и способен выводить ненужные бактерии. Лучшие из трав с антибактериальными свойствами называются: брусника, ромашка, можжевельник, зверобой, медвежьи ушки, чабрец, тысячелетник, золотарник, багульник. […]
• Важным критерием эффективности проведенного лечения является разрешение клинических проявлений заболевания. Оглавление Последние новости прессы свидетельствуют, что прием Азитромицина при хламидиозе связан с повышенным риском внезапной смерти. Азитромицин - это широко используемый антибиотик. Врачи […]
• Передозировка препаратом может проявляться тошнотой, рвотой, повышенной утомляемостью вплоть до патологической сонливости. Лечение проводят путем промывания желудка. Нолицин пожилым людям принимать рекомендуется с осторожностью – препарат может вызвать раздражительность, угнетенное состояние, тревожность и […]
• Эпителиальные клетки начинают отторгаться зачастую в результате протекания воспалительного процесса. Хотя исследования, проведенные в этой области, раскрывают несколько потенциальных причин, которые провоцируют развитие эрозии шейки матки. радиохирургия (оперирование сверхчастотными электромагнитными […]
• Хронический мастит излечивается препаратом «Мамикур», в состав которого входят гормоны, ферменты, антибиотики и «Масти Вейксим». «Масти Вейксим» применяют по одной дозе по 10 мл в течение пяти суток следующим образом: первый интервал — 12 часов, через день антибиотики, выписанные ветеринарами, и опять […]
• Хламидии могут долго находиться в организме без видимых симптомов, не беспокоя больного. Инкубационный период составляет 1-2 недели. Заболевание начинается с воспаления уретры (уретрита), которое проявляется болезненностью при мочеиспускании, но иногда протекает без неприятных ощущений. Организм должен сам […]
• Таблетки от цистита — рассмотрим самые популярные препараты Лучший лекарственный препарат от цистита Дозировка для препаратов норфлоксацина - 400 мг, офлоксацина - 200 мг, ципрофлоксацина - 250 мг. Их нужно принимать 2 раза в сутки в течение 3 дней. Фурагин – препарат той же группы, что и Фурадонин, […]
• Также эффективна мазь Траумель при лактостазе и фиброзно-кистозной мастопатии (ФКМ). Противопоказания · гнойно-воспалительные процессы (мастит, нагноение фистул, трофические язвы), В таблетках содержится молочный сахар (лактоза), о чем следует помнить при назначении указанной лекарственной формы пациентам […]
• колбасные изделия; Надо помнить, что ехать на юг можно, если миома не проявляет признаков рецидива. фастфуд в любом его проявлении; майонез, кетчуп; Способ приготовления: взять 300 гр. мяса,100гр.ветчины. 2 л воды, 400 гр. капусты, 100 гр. картофеля, 100гр.помидоров, морковь, лук, зелень укропа, петрушки, […]